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免疫熒光法實驗步驟

點擊次數:982 更新時間:2015-08-24
 

實驗步驟

1、滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,10min后棄去,使標本保持一定濕度。

2、滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間(參考:30min)。

3、取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸3-5 min,不時振蕩。

4、取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。

5、立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度,一般可用“+"表示:

(-)無熒光;(±)極弱的可疑熒光;(+)熒光較弱,但清楚可見;(++)熒光明亮;(+++ --++++)熒光閃亮。待檢標本特異性熒光染色強度達“++"以上,而各種對照顯示為(±)或(-),即可判定為陽性。抗體

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