1、為什么在免疫組化中標本要進行固定?
(1)防止標本從玻片上脫落;
(2)除去防礙抗原-抗體結合的類脂,使抗原抗體結合物易于獲得良好的染色結果;
(3)固定的標本易于保存。
2、標本固定的基本原則是什么?
(1)不能損傷細胞內的抗原;
(2)不能凝集蛋白質;
(3)不能損傷細胞形態;
(4)固定后應保持細胞膜的通透性,以允許抗體進入與抗原結合。
3、常用抗原物質的固定方法的*選擇是什么?
(1)丙酮的作用是溶解膜磷脂,所有的脂質雙層(胞膜、核膜、細胞器膜等)已被破壞,但蛋白和多糖類不受影響。而丙酮固定后不需進行抗原修復,它是一種非交聯固定劑。
(2)多聚甲醛固定對酶類和脂類保護的好,易與蛋白發生交聯,所以一般經過甲醛或PFA固定后的標本一般需要抗原修復。
(3)蛋白質抗原:95%~*乙醇;
(4)酶、激素:丙酮;
(5)免疫球蛋白:*;
(6)病毒:丙酮、*、無水乙醇;
(7)多糖、細菌等:微火加熱,甲醇、10%甲醛、丙酮;
(8)類脂(異嗜性抗原):10%甲醛,10%佛茂爾(ForMol)。