有限稀釋法對于篩選雜交瘤來說,是zui普通的方法,在許多實驗室中都在使用。但是,作為相對舊的技術,已經不能滿足當今的需求。方法自身具有許多缺點:
1、人工操作,操作及重復的步驟太多,不可避免容易出錯。
2、速度慢,效率低。只能保證30-40%的孔有細胞生長。對于高通量篩選來說,不能滿足要求。
3、不能保證單克隆,需要亞克隆3-4次,所以,人工和耗時都較多。
4、有限稀釋在ELISA檢測前,并不知道哪一個克隆滿足抗原特異性的要求。所以,需要對所有克隆,都要zui少做一次ELISA鑒定。
除了有限稀釋方法,現在相對先進的細胞分選技術也得到普遍應用。一般就是細胞分選儀或者流失細胞技術對雜交瘤細胞進行篩選。其原理是先將細胞分散開,沒有細胞結團。通過在細胞表面或細胞內標記熒光信號。當單個細胞在壓力作用下單個通過玻璃毛細管的時候,儀器可以自動檢測單個細胞的熒光信號強度。熒光信號強度反應這個細胞的相應抗體表達水平。zui后,將高熒光信號強度的細胞收集,再通過有限稀釋得到高水平表達的單克隆;或者也可以使用單細胞收集器收集高水平表達的單個雜交瘤細胞。