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人膽酸(CA)ELISA試劑盒組成和操作步驟

點擊次數:749 更新時間:2017-03-02
 

TSZelisa試劑盒標本要求

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

人膽酸(CA)ELISA試劑盒組成

130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶

2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(160pmol/L)0.5ml×1瓶

3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶

4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份

5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張

6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個

人膽酸(CA)ELISA試劑盒操作步驟

1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照TSZelisa試劑盒下列圖表在小試管中進行稀釋。

80pmol/L5號標準品150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液

40pmol/L4號標準品150µl的5號標準品加入150µl標準品稀釋液

20pmol/L3號標準品150µl的4號標準品加入150µl標準品稀釋液

10pmol/L2號標準品150µl的3號標準品加入150µl標準品稀釋液

5pmol/L1號標準品150µl的2號標準品加入150µl標準品稀釋液

2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,然后再加待測樣品10µl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶標試劑50µl,空白孔除外。

7.溫育:操作同3。

8.洗滌:操作同5。

9.顯色:每孔先加入顯色劑A50µl,再加入顯色劑B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10.終止:每孔加終止液50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。TSZelisa試劑盒測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

 
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