丘腦分泌素受體抗體(食欲素受體)的生wu素化標(biāo)記實(shí)驗(yàn)要點(diǎn):
1.如在反應(yīng)混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會(huì)抑制標(biāo)記反應(yīng)。因此,蛋白質(zhì)在反應(yīng)前要對(duì) 0.1mol/L碳suan氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析;
2.所用的NHSB及待生wu素化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會(huì)有所不同,選擇不當(dāng)則影響標(biāo)記的效率,應(yīng)先用幾個(gè)不同的分子比來(lái)篩選最適條件;
3.用NHSB量過(guò)量也是不利的,抗原的結(jié)合位點(diǎn)可能因此被封閉,導(dǎo)致抗體失活;
4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生wu素化不足,此時(shí)可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等;
5.當(dāng)游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)時(shí),或位于酶的催化位點(diǎn)時(shí),生wu素化會(huì)降低或損傷抗體蛋白的結(jié)合力或活性;
6.生wu素還可能與不同的功能基團(tuán),如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及ben酚基,也可與糖基共價(jià)結(jié)合;
7.交聯(lián)反應(yīng)后,應(yīng)充分透析,否則,殘余的生wu素會(huì)對(duì)生wu素化抗體與親和素的結(jié)合產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)作用;
8.在細(xì)胞的熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對(duì)某些細(xì)胞可導(dǎo)致高本底。
9.產(chǎn)品僅用于科研,詳見(jiàn)說(shuō)明。
小鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1a(mouse SDF-1a)
小鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1R(mouse SDF-1R)
小鼠可溶性E-選擇素(mouse sE-Selectin/sCD62E)
小鼠可溶性L-選擇素(mouse sL-Selectin/sCD62L)
小鼠可溶性P-選擇素(mouse sP-Selectin/sCD62P)
小鼠P物質(zhì)(mouse Substance P)
小鼠催乳素(mouse PRL)
小鼠孕酮(mouse PROG)
小鼠睪酮(mouse TESTO)
小鼠胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(mouse TARC)
小鼠組織因子(mouse TF)
小鼠組織因子抑制物(mouse TFPI)
小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(mouse TGF-β1)
小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β2(mouse TGF-β2)
小鼠可溶性粒細(xì)胞靶受體(mouse sTREM-1)
小鼠端粒酶(mouse Telomerase)
小鼠Toll樣受體-2(mouse TLR-2)
小鼠Toll樣受體-4(mouse TLR-4)
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1(mouse TIMP-1)
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-2(mouse TIMP-2)
小鼠腫瘤壞死因子-a(mouse TNF-a)
小鼠腫瘤壞死因子-b(mouse TNF-b)
小鼠腫瘤壞死因子-r(mouse TNF-r)