在生化分析測量中,酶的測定比較復雜,要求條件較高,測試比較困難。一般生化分析儀只要酶的測定準確,重復性好,其它項目的測定一般都會沒有問題。現就生化分析儀酶分析中常見的測試不準確、重復性差的幾點原因進行分析,以供使用者和維修工程師參考。
生化分析儀酶的測定一般用動力學法進行測試,其原理是在酶反應的zui適條件下,用物理、化學或酶促反應的分析方法,在反應速度恒定期與被測物的活性或濃度成正比。計算方法有兩種:
1)法:
酶活力(U/L)=ΔA×(反應液體積/樣品體積)×(1000/消光系數)
2)相對法:
(U/L或mmol/L)=[ΔA(測定)/ΔA(標準)]×標準物的活力或濃度
因此,生化分析儀酶的測定與許多條件有關。條件的設置,如:波長、溫度、參數、測試方法,延遲和測試時間,吸液量等。另外還與的試劑,樣品的采集、保存有關,同時與及時進行質控,從一個樣品進入另一個樣品測試時及時清洗也有很大關系。
例如GPT的測試一般選擇為:波長為340nm,測定時間為20秒,延遲時間為40秒,吸液量為350μl,溫度設定為37℃,試劑空白可任意選擇。
因此GPT的測試結果與以下幾點有關:
1、340nm為波長低端,能量較低,同時340nm濾光片使用較多,易老化。所以波長漂移不準,半寬度變化都會影響測量的準確度和重復性。
2、動態法測試有延遲時間,測試時間要求。延遲時間在動態法中為預反應時間,測試時間在動態法中為測試的總時間。零級動力學法是針對特定時間段而言的,酶反應剛啟動時反應比較復雜,雜反應較多,必需經過一段延遲時間才能進入穩定反應期,各試劑商對這兩段時間有嚴格規定。所以動態法測試一般溫度在37℃,延遲時間不少于15秒為好。
3、對于參數的輸入應按試劑要求輸入其給定值,一般試劑商在試劑盒說明書中給予說明。
4、反應溫度。
5、測試空白要準確。
6、吸液量的大小直接影響交叉污染和測量的重復性,建議測試污染性大的物質試劑量應相應增加。一般應大于400μl,一般項目為500μl即可。
7、測試不準確、重復性差從操作上看主要有:儀器本身原因如比色杯中有氣泡;光源燈老化;光源電壓不穩;340nm濾光片性能變差,透射性變小;波長不準確等有關。一般檢查液路接口是否松動漏氣,更換光源燈泡和340nm濾光片即可解決。至于電路問題,加熱元件損壞,溫度不受控的問題只能由工程師解決。