一、電泳技術的原理
混懸于溶液中的帶電質點在外加電場作用下,向著與之帶相異電荷的電極方向移動的現象叫做“電泳”。利用電泳現象來達到將多組分物質分離分析或分離制備的技術叫做電泳技術。為電泳技術提供外加電場的儀器稱為電泳儀。
蛋白電泳支持介質的種類較多,如濾紙、醋酸纖維素膜、瓊脂糖等。瓊脂糖是一種鏈狀多糖,具有膠化效能高,低濃度,高透明度,紫外-可見光區域無吸收,不吸附蛋白質,分辨率清晰,透明可直接掃描等優點。
蛋白質和氨基酸都是兩性電解質,其分子中的羧基(—COOH)和氨基(—NH2)在溶液中均可解離。血清蛋白質的等電點均低于pH7.0,在pH8.6的緩沖液中帶負電,向陽極移動,分子小且帶電荷多者,則移動速度較快,反之亦然。根據在電場中移動速度之快慢則將血清蛋白分為Alb,α1-球蛋白,α2-球蛋白,β-球蛋白及γ-球蛋白。
二、電泳圖形的識別
電泳圖形的五個區帶,并不是都由單一組分構成,而是分別包括數個成分。
1. Alb和γ-球蛋白:主要成分分別為Alb和IgG。
2. α1-球蛋白:主要是α1抗胰蛋白酶和α1酸性糖蛋白。α1抗胰蛋白酶是具有蛋白酶抑制作用的一種急性時相反應蛋白。當肺部多形核白細胞的吞噬活躍時,溶酶體彈性蛋白酶釋放。若α1抗胰蛋白酶缺乏,酶過度作用于肺泡壁的彈性纖維而導致肺氣腫。α1酸性糖蛋白在急性時相反應時,與α1抗胰蛋白酶同時增高,在嚴重肝損害、腎病綜合癥時降低。
3. α2-球蛋白:主要為結合珠蛋白和α2-巨球蛋白。結合珠蛋白與血紅蛋白結合成一穩定的復合物,以防止血紅蛋白從腎小球排出,既貯存了鐵,又保護腎小管免受游離血紅蛋白損傷。
4. β-球蛋白:以β脂蛋白、轉鐵蛋白和血紅素結合蛋白為主。還包括補體成分。
三、異常血清蛋白電泳圖形
1. 正常血清電泳圖形
通常從正極到負極為Alb,α1-球蛋白,α2-球蛋白,β-球蛋白及γ-球蛋白五個區帶。β包括β1和β2,β2主要是C3成分。AFP位于Alb和α1-球蛋白之間。若樣品為血漿,則纖維蛋白原泳動在β和γ之間。
由于各實驗室的條件不同,應建立相應的正常參考范圍。影響因素包括采血部位、時間、季節等;個體間的差異;操作技術等。
2.急性炎癥及應激型:當機體受到各種損傷或炎癥刺激時的病理現象。
主要特征: Alb減少或正常,α1、α2-球蛋白增高,γ-球蛋白增高不明顯,當炎癥轉為慢性時,可明顯增加。
病理生理: Alb下降主要是由于蛋白分解亢進所致,α1和α2-球蛋白增加與急性時相反應蛋白α1糖蛋白增加有關,β區帶減少是由于轉鐵蛋白分解代謝增加所致。新生兒由于結合珠蛋白合成功能不*,當有炎癥病灶時,α2區帶無明顯增高,而α1區帶可明顯增高。
3.腎病型:由于腎小球受損引起低蛋白血癥,蛋白尿,高脂血癥以及全身性水腫。
主要特征: Alb明顯降低,α1-球蛋白輕度增加,α2-球蛋白明顯增加,γ-球蛋白降低、正常或增高。小兒類脂樣腎病時,γ-球蛋白可降低,有時可降低至零;成人腎病綜合癥時,γ-球蛋白通常增加,特別是狼瘡性腎病。
病理生理: Alb降低是由于腎小球濾過增加所致。α1-球蛋白增加,主要是小分子量的α1糖蛋白增加,可能是為了補償由于Alb降低引起的低滲透壓,雖然α1糖蛋白也大量丟失于尿中,但體內合成量超過排泄量,故仍可增高。α2-球蛋白明顯增加是由于α2-球蛋白和低密度脂蛋白相對增加所致。β球蛋白降低主要是分子量小的轉鐵蛋白排泄于尿中所致。γ-球蛋白降低主要是由于漏出于尿中及體內分解亢進所造成,而慢性腎炎、狼瘡性腎炎等γ-球蛋白增加,可能是由于免疫刺激,使IgG增加所致。
4. 彌漫性肝損傷型
主要特征: Alb明顯降低, α1-球蛋白在輕度時可略增加,但肝細胞破壞嚴重時,則α1、α2和β球蛋白通常均降低,在膽汁郁積性肝炎時,α2和β球蛋白可增高,γ-球蛋白輕度或中度增高。
病理生理: Alb雖合成減少,但其半衰期長,其濃度減少多出現于發病后十天,隨病情恢復而至正常,若為慢性則逐漸減少,其減少程度與肝炎的嚴重程度相一致。α1-球蛋白在肝炎初期,作為急性期反應物質常增加,而肝損傷嚴重時則降低,在致命的肝功能衰竭時,α1-球蛋白可降低到很低水平。α2-球蛋白的降低,可能是由于結合珠蛋白合成降低所致,但膽汁郁積性肝炎時,由于脂蛋白增加,可見到α2-球蛋白部位增高,當急性肝壞死時,α2-球蛋白則明顯減少。β球蛋白在肝炎早期幾乎無變化,當肝細胞損傷嚴重時合成減少。幾乎所有肝臟疾病γ-球蛋白因合成亢進均增高,其增加的范圍與疾病的嚴重程度相一致。
5. 肝硬化型
主要特征: Alb均有不同程度的降低,α1、α2和β球蛋白正常或降低,γ-G明顯增高且寬度增加,可見β-γ橋。
病理生理: 肝細胞受損導致Alb明顯降低,β-γ橋的出現與血清免疫球蛋白,特別是IgA、IgM、IgG同時增加有關,其中以IgA影響較大,當IgA和IgM泳動在β和γ之間,使β區帶與γ區帶融合而形成β-γ橋。
6. 原發性肝癌
主要特征: 在Alb與α1-球蛋白之間出現一小的區帶,稱為甲胎蛋白帶。
病理生理; 肝癌時,血清中的甲胎蛋白濃度為正常人的數十乃至數萬倍。
7.寬幅高γ-G血癥型(多株免疫球蛋白增高癥)
主要特征: γ-G的寬度明顯增加,呈寬幅高峰。
病理生理: 多株漿細胞以大致相同的速度增殖,大量合成免疫球蛋白所致,呈多株性,若合并急性感染,則α1、α2明顯增高。
8. M蛋白血癥(單株免疫球蛋白異常癥)
主要特征:M蛋白又叫異常免疫球蛋白,其區帶寬度與Alb帶大致相等或較其狹窄,常分布在α2至慢γ-G部位。
病理生理: M蛋白是由某一細胞株分泌大量結構相同、電泳遷移率一致的蛋白。多發性骨髓瘤及原發性巨球蛋白血癥時,M蛋白以外的其他免疫球蛋白明顯降低,其可能是由于M蛋白大量消耗氨基酸,致使其他免疫球蛋白相對合成不足,以及M蛋白代謝亢進,其他免疫球蛋白的分解代謝也隨之增加,故而含量降低。