適用
Abraxis氟喹諾酮檢測試劑盒適用于檢測食物產品中氟喹諾酮的含量。
原理
Abraxis 氟喹諾酮檢測試劑盒的原理是競爭酶聯免疫反應。利用提取液通過震蕩萃取從樣品中提取氟喹諾
酮。然后經稀釋、過濾、待測。在固相載體微孔板中加入氟喹諾酮-HRP 酶結合物,然后加入標準和處理的
樣品,然后再加入氟喹諾酮抗體引發反應。孵育10 分,樣品中的氟喹諾酮和酶標氟喹諾酮競爭于氟喹諾
酮抗體反應,氟喹諾酮抗體和微孔結合。洗板除去沒有反應的試劑。加入底物顯色劑、無色的顯色劑轉化
為藍色的產物;孵育30 分鐘后加入反應終止液終止反應,顏色由藍色變為黃色;在450nm波長進行檢測,
樣品中的氟喹諾酮濃度與吸收光強度成反比。
特異性
Abraxis氟喹諾酮檢測試劑盒不能區分不同種類的氟喹諾酮,檢測不同的氟喹諾酮交叉率也不同。以下是試
劑盒對不同的氟喹諾酮的交叉反應列表。
檢測限
肉、魚蝦: 1 ppb
蜂蜜: 2 ppb
試劑盒組成
試劑盒保存在2-8攝氏度。在有效期內都可以使用
1、96孔酶標板:1塊(12×8條)。
2、氟喹諾酮標準品貯備液(Standard): 6瓶(1ml/瓶),濃度分別為0, 0.2, 0.8, 3.2 6.4 和16 μg/L (ppb)
3、氟喹諾酮HRP酶標記物:1瓶(6ml)
4、兔抗氟喹諾酮抗體:1瓶(6ml)
5、5X 濃縮洗液:1瓶(100ml)
6、底物顯色液:1瓶(12ml)
7、終止液:1瓶(12ml 、1N HCl)。
8、使用說明書
注意事項
1.配套使用所提供的試劑,不要同其它公司的產品混用,不要將不同批次的產品混用。
2.樣品稀釋或含有雜質很可能對結果的準確性有影響。
3.不要使用過期的產品。
4.使用之前將所有試劑回升至室溫20-28ºC.不要在室溫放置超過24 小時。
5. 氟喹諾酮是抗生素,小心對待。
6. 停止液是1N 鹽酸,避免接觸皮膚。如果接觸請用大量的水沖洗。
7. 洗液是5X濃縮的,在使用時要用無離子水稀釋(如100ml洗液加400ml無離子水),用稀釋后的溶
液洗板
試劑盒未提供的材料
1、蒸餾水或無離子水
2、量筒100ml
3、燒杯(樣品提取和收集)
4、離心機
5、移液器50 μL
6、50 and 100 μL 8 道移液器
7、吸水紙
8、450nm 酶標儀
9、計時器
10. 攪拌器
11. SPE C18 Column 200mg/3mL
12. 乙腈
13. 乙腈
14. 洗瓶
15. 乙腈
16. HCl
17. 乙腈
18. 10 mM PBS, [0.31 g NaH2PO4-2H2O+ 2.87 g Na2HPO4-12H2O + 9 g NaCl,加無離子水定容到一升。
樣品處理
肉樣
1.勻漿化樣品。
2.在50ml的離心管中加入5克勻漿化的樣品,再加入10 ml乙腈
3.劇烈震蕩5分鐘
4.室溫3000轉離心5分鐘
5.取2ml上清液到一個干凈的玻璃試管中,用氮氣吹干。
6.然后加入2ml己烷,劇烈震蕩1分鐘,再加入2 mL10 mM PBS混勻。
7.室溫3000轉離心5分鐘。
8.移除上層液體。
9.把下層液體轉移到一個新的管中,待測。
蜂蜜樣品(1:2 稀釋)
1.在一個15ml 的帶螺旋蓋的玻璃瓶中加入1g 蜂蜜。
2.加入5 ml 1 M HCl 劇烈震蕩混勻。
3.室溫3000轉離心5分鐘。
4.用6ml 甲醇和6ml水前處理C18 柱。
5.把第三步驟的清澈的樣品萃取液過柱(flow rate: 15 drops/min)。
6.用3 ml 水和3 ml 5% 甲醇/水溶液洗柱。
7.用弱的氮氣流吹2 min清除殘留的水樣。
8.用5%的乙酸/甲醇溶液洗脫(flow rate: 15 drops/min)
9.用氮氣吹干洗脫液。
10.用2 ml 10 mM PBS 溶解干燥的萃取物,劇烈混勻。
11.待測,檢測結果乘以稀釋倍數2。
操作步驟
注意:標準和樣品做平行可以增加精密度和準確度
1、使用前將試劑盒和樣品處理物提前從冰箱中拿出來使其達到室溫。
2、從鋁箔袋中拿出要求數量的微孔條,放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。
3、在對應的微孔中加入50μL 1:10 稀釋后的標準和樣品,確保吸頭要干凈。
4、每個測試孔都加入50 μL酶結合物
5、每個測試孔都加入50 μL抗體溶液
6、孵育30分鐘
7、孵育完成后,將微孔中的溶液倒入水槽中,用1X 洗液加滿微孔然后倒掉,重復三次,總共四次洗板。
8、在zui后一次洗板后拍板,去掉殘留的洗液。
9、每個測試孔加入100μL底物。
10、孵育30分鐘
10、每個測試孔加入100μL終止液。
11、450nm 下讀取每個孔的吸光度值(OD)。
結果分析
1.半定量結果的判定,可根據樣品的吸光度值與標準的吸光度值來判定,樣品的吸光度值低于某個標準
的吸光度值,則說明樣品的氟喹諾酮含量大于此標準的濃度,樣品的吸光度值高于某個標準的吸光度
值,則說明樣品的氟喹諾酮含量小于此標準的濃度。
2.定量結果判定,需要以標準的吸光度值為X軸,標準濃度的對數為Y軸繪制曲線圖,將標準濃度吸光
度值的點用直線連接,樣品的吸光度值也位于這條直線上,根據樣品的吸光度值在Y軸上即可找到相
應樣品的濃度,如果樣品的吸光度值大于zui小標準的吸光度值或小于zui大標準的吸光度值,即可說明
此樣品中氟喹諾酮的含量小于0.2ppb 或大于16ppb。