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大鼠5脂加氧酶(5-LOX)ELISA試劑盒使用說明書

點擊次數:1014 更新時間:2011-05-26
 

大鼠5脂加氧酶(5-LOX)ELISA試劑盒使用說明書

 

原理
本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 5-LOX 單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的 5-LOX與單抗結合,加入生物素化的抗大鼠5-LOX,形成免疫復合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結合,加入底物工作液顯藍色,zui后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,5-LOX濃度與OD值成正比,可通過繪制標準曲線求出標本中5-LOX濃度。
試劑盒組成(2-8℃保存)
酶標板(Coated Wells) 96孔 酶標抗體工作液(Enzyme Conjugate) 12ml
10×標本稀釋液(Sample Buffer) 12ml 20×濃縮洗滌液(Wash Buffer) 50ml
標準品(Standards):2000ng/瓶 2瓶 底物工作液(TMB Solution) 12ml
*抗體工作液(Biotinylated Antibody) 12ml 終止液(Stop Solution) 12ml

準備試劑與收集血樣
1. 收集標本:血清、血漿(EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20 ℃或-70 ℃)保存,避免反復凍融。
2. 標準品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成2000ng/ml的溶液。設標準管8管,*管加標本稀釋液900ul,第二至第八管加入標本稀釋液500ul。在*管中加入2000ng/ml的標準品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。
3. 10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)
檢測程序
1. 加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應板充分混勻后置37℃120分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。
3. 每孔中加入*抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置37℃60分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃30分鐘。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul,置37 ℃暗處反應15分鐘。
8. 每孔加入100ul終止液混勻。
9. 30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。
結果計算與判斷
1. 所有OD值都應減除空白值后再行計算。
2. 以標準品200、100、50、25、12.5、6.25、3.12、0 ng/ml為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。
3. 根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應5-LOX含量。
試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的5-LOX 檢測濃度小于1.6ng/ml。
2. 特異性:可同時檢測重組或天然的大鼠5-LOX。不與大鼠其它細胞因子有交叉反應。
3. 重復性:板內、板見變異系數均小于10%。
注意事項
1. 以上標準孔及待測樣品均建議做復孔,每次測定應同時做標準曲線。
2. 洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致度誤差及OD值錯誤地升高。
3. 板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。
4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。
4. 本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷!

 

 
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