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肝素含量測定法 |
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點擊次數:1372 更新時間:2011-08-23 |
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本法系依據硫酸魚精蛋白能中和抗凝劑肝素,從而影響血漿凝固時間的原理,測定供試品中肝素含量。 試劑(1)缺血小板人血漿 無菌采集人全血于3.8%枸櫞酸鈉抗凝劑(9∶1)中,混勻,以每分鐘1500轉在4℃離心30分鐘,用塑料注射器取上層2/3的血漿,以每分鐘3500轉在4℃離心30分鐘,取上層2/3血漿,分裝于塑料管中,每支3ml,保存-40℃備用。 (2)三羥甲基氨基甲烷( Tris)緩沖液(pH7.5) 取三羥甲基氨基甲烷 7.27g、氯化鈉5.27g,加水溶解并稀釋至1000ml(用鹽酸調節pH至7.5)。 (3)腦磷脂混懸液 凍干腦磷脂加水復溶,取適量,用生理氯化鈉溶液稀釋,稀釋后的腦磷脂混懸液應使空白凝固時間在200~300秒。 (4)0.025 mol/L氯化鈣溶液 取氯化鈣(CaCl2•2H2O)147g溶于1000ml水中,制成1mol/L氯化鈣貯備液。臨用時,用水將1mol/L氯化鈣貯備液稀釋40倍。 (5)硫酸魚精蛋白溶液 取硫酸魚精蛋白適量,用pH7.5 Tris緩沖液溶解并稀釋成每1ml含1~20 mg的溶液。 供試品溶液的制備 于每支含不同濃度的硫酸魚精蛋白溶液10μl的塑料管中,分別加入按標示量復溶后的供試品0.5ml,混勻。 測定法 在已含有缺血小板人血漿0.1ml的塑料管中,加入腦磷脂混懸液0.1ml,混勻,37℃放置1分鐘,加供試品溶液0.1ml、已預熱至37℃的0.025 mol/L氯化鈣溶液0.1ml,記錄凝固時間。用Tris緩沖液(pH7.5)0.1ml替代供試品溶液,同法操作作空白對照。空白對照凝固時間不低于200秒試驗成立。取凝固時間zui短的供試品管,作為硫酸魚精蛋白中和0.5ml供試品中的肝素量。硫酸魚精蛋白10μg中和1IU肝素。例如凝固時間zui短的供試品管中含硫酸魚精蛋白30μg,則中和供試品0.5ml中的肝素量則為3IU,即供試品每1ml含6IU肝素。 【附注】(1)直接與血和血漿接觸的器具應為塑料制品或硅化的玻璃制品。 (2)采用全自動凝血儀操作時,參考儀器使用說明書進行。 |
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