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胃蛋白酶的測試步驟 |
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點擊次數:1531 更新時間:2011-09-02 |
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胃蛋白酶(英文名稱:Pepsin)是一種消化性蛋白酶,由胃部中的胃粘膜主細胞(gastricchiefcell)所分泌,功能是將食物中的蛋白質分解為小的肽片段。胃蛋白酶的前體被稱為胃蛋白酶原。胃腺主細胞分泌的蛋白酶。初分泌時為無活性的胃蛋白酶原,在胃酸或已激活的胃蛋白酶的作用下轉變?yōu)榫呋钚缘奈傅鞍酌浮T谶m宜環(huán)境下(pH約為2)可將蛋白質分解為和胨,很少產生小分子肽或氨基酸。 取試管6支,其中3支各精密加入對照品溶液1ml,另3支各精密加入供試品溶液1ml,置37℃±0.5℃水浴中,保溫5分鐘,精密加入預熱至37℃±0.5℃的血紅蛋白試液5ml,搖勻,并準確計時,在37℃±0.5℃水浴中反應10分鐘。立即精密加入5%三氯醋酸溶液5ml,搖勻,濾過,取續(xù)濾液備用。 另取試管2支,各精密加入血紅蛋白試液5ml,置37℃±0.5℃水浴中保濕10分鐘,胃蛋白酶再精密加入5%三氯醋酸溶液5ml,其中1支加供試品溶液1ml,另1支加上述鹽酸溶液1ml,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,分別作為供試品和對照品的空白對照,照分光光度法(附錄ⅣA)在275nm的波長處測定吸收度,算出平均值AS和A,按下式計算。 A×Ws×n每1g含蛋白酶活力(單位)=As×W×10×181.19式中AS為對照品的平均吸收度;A為供試品的平均吸收度;Ws為對照品溶液每1ml中含酪氨酸的量,μg;W為供試品取樣量,g;n為供試品稀釋倍數。 在上述條件下,每分鐘能催化水解血紅蛋白生成1μmol酪氨酸的酶量,為一個蛋白酶活力單位。 |
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