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人前列腺素E2(PGE2)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書 |
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點擊次數:918 更新時間:2011-11-29 |
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藥品名稱:人前列腺素E2(PGE2)酶聯免疫分析試劑盒 使用目的: 本試劑盒用于測定人血清、血漿、或其它組織液中前列腺素E2(PGE2)的含量。 實驗原理: 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人前列腺素E2(PGE2)水平。用純化的抗-PGE2抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入人前列腺素E2(PGE2),再與HRP標記的羊抗人抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的前列腺素E2(PGE2)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人前列腺素E2(PGE2)濃度。 試劑盒組成: 1、20倍濃縮洗滌液30ml×1瓶7終止液6ml×1瓶 2、酶標試劑6ml×1瓶8標準品(720ng/L)0.5ml×1瓶 3、酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶 4、樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份 5、顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張 6、顯色劑B液6ml×1/瓶12 密封袋1個 標本要求: 1.標本采集后盡早進行實驗。血清、血漿可以直接檢測 2.組織:按相關文獻提取后,取上清液待測 3.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 4.可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。 操作步驟: 1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為(480ng/L ,320ng/L,160ng/L,80ng/L, 40ng/L)。 2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。 3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用 5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。 6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 7. 溫育:操作同3。 8. 洗滌:操作同5。 9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。 11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。 計算以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。 注意事項: 1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。 2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。 3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。 4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。 5.嚴格按說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準 6.底物請避光保存。 7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。 9.本試劑不同批號組分不得混用。 |
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