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人(Human)甲胎蛋白異質體3(AFP-L3)ELISA的性能及操作步驟 |
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點擊次數:999 更新時間:2011-12-09 |
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人(Human)甲胎蛋白異質體3(AFP-L3)ELISA的性能及操作步驟 試劑盒性能: 1. 靈敏度:人(Human)甲胎蛋白異質體3(AFP-L3)zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。 2. 特異性:不與其它細胞因子反應。 3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。 操作步驟: 1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。 2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。 3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。 4. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。 5. 每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。 6. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。 7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育5分鐘。避免光照。 8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。 9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。 |
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