常用抗凝劑的配制及用法
在醫學實驗中常需動物的全身抗凝,采出的全血或血漿有的也需加入適當的抗凝劑抗凝。對抗凝劑的要求是:用量少、溶解度大、不帶進干擾實驗的雜質。
一、肝素
(1)肝素抗凝作用原理
肝素的抗凝作用很強,作死亡復蘇等實驗時,常用它作動物全身抗凝劑,肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力,阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用,從而使血液不發生凝固。
(2)配制和用量
純的肝素10mg能抗凝65~125 ml血液(按lmg等于125U,10~20U能抗1 ml血液計)。但由于肝素制劑的純度高低以及其保存時間長短不等,因而其抗凝效果也不相同。一般可配成1%肝素生理鹽溶液,用時取0.1毫升于試管內,100℃烘干,每管能抗凝5~10ml血液。也可將抽血注射器用配好肝素濕潤一下管壁,直接抽血至注射器內而使血液不凝。在動物實驗作全身抗凝時,一般劑量為:大白鼠2.5~3.0mg/200~300g體質量,兔10mg/kg體質量,狗5~10mg/kg體質量。肝素可改變蛋白質等電點,因此當用鹽析法分離蛋白質作蛋白質各部分的測定時,不可采用肝素。市售的肝素鈉溶液每毫升含肝素12500U,相當于100mg。
常用抗凝劑的配制及用法
二、草酸鹽合劑
(1)原理
草酸胺能使血細胞略為膨大,而草酸鉀能使血細胞微縮小,因此草酸銨與草酸鉀按3:2比例配置,可使血細胞體積保持不變;加福爾馬林則能防止微生物在血中繁殖。此抗凝劑zui適于作紅細胞比積測定。
(2)配制方法及用量
草酸銨1.2g、草酸鉀0.8g、福爾馬林1.0ml、蒸餾水加至100ml每毫升血加草酸鹽合劑0.1ml(即相當草酸銨1.2mg,草酸鉀0.8mg)。根據取血量將計算好的草酸鹽劑量加入玻璃容器內烤干備用。如取0.5ml于試管,烘干后每管可使5ml血不凝固。
(3)注意事項
草酸的作用在于能夠沉淀血凝過程中所必需的鈣離子,而達到抗凝目的。用時注意加的量應適中,不能過多,以免妨礙去蛋白質血濾液的制取。不適用于血液內鈣或鉀的測定,也不能用于血液非蛋白氮測定。
三、枸櫞酸鈉
常配成3~5%水溶液。也可直接加粉劑,每毫升血加3~5mg,即可達到抗凝目的。
枸櫞酸鈉可使鈣失去活性,防止凝血。但其抗凝作用較差,堿性較強,不宜作化學檢驗之用。僅可用于紅細胞沉降速度測定。急性血壓測定實驗所用枸櫞酸鈉為5~6%溶液。
四、草酸鉀
(一)原理和注意事項
草酸鉀為zui常用的抗凝劑。其與血液混合后可迅速與血液中的鈣離子結合,形成不溶解的草酸鈣,使血液不凝固。常用于非蛋白氮測定,但不適用于測定鉀和鈣。草酸鹽能抑制乳酸脫氫酶、酸性磷酸酶和淀粉酶的活性,故應注意。
(二)配制及使用方法
取草酸鉀10g,加蒸餾水少許使溶解,再加蒸餾水至100ml。配制成10%水溶液,如每管加0.1ml則可使5~10ml血不凝。一般如作微量檢驗,用血量較少,可配制成2%溶液,如每管加0.1ml可使1~2ml血液不凝。
五、乙二胺四乙酸二鈉鹽(EDTA)
EDTA對血液中鈣離子有很大的親和力,能與鈣離子絡合而使血液抗凝。每0.8mg可抗凝1ml血液。除不能用于血漿中鈣、鈉及含氮物質之測定外,適用于多種抗凝