產(chǎn)品僅用于科研注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。 產(chǎn)品名稱:阿留申病病毒PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格 英文名稱:Aleutian Disease Virus(ADV)PCR 編號(hào):HE30600-R 類別:PCR檢測(cè)試劑盒 儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。 運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。 ? 儲(chǔ)需要自備的器材: 1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20 µL、200 µL、1000 µL)。 2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水 處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。 特點(diǎn): 1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡(jiǎn)單,定量準(zhǔn)確快速。 2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp。 3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 4. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。 保存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:含量97.0%-101.5%,II型 包裝;5g 葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:>99% 包裝;100mg 葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;1ml 葡萄糖激酶試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:>98% 包裝;25ml 葡萄糖6磷酸異構(gòu)酶試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:含量≥85% 包裝;5ml 葡萄糖6磷酸脫氫酶試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:98%,GC,進(jìn)分sigma 94577 包裝;1g 葡萄糖-6-磷酸酶/葡萄糖-6-磷酸酯酶試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR 包裝;5g 破傷風(fēng)試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:>98% 包裝;1g 蘋果酸脫氫酶1試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:>98.5% 包裝;1g 平滑肌肌動(dòng)蛋白試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR 包裝;5MG 嘌呤核苷酸磷酸化酶試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;1g 脾臟酪氨酸激酶試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) 包裝;5g 皮質(zhì)抑素/皮質(zhì)醇穩(wěn)定蛋白試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;100g 皮質(zhì)酮/腎上腺酮試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 包裝;25g 皮質(zhì)素-3試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定,標(biāo)準(zhǔn)品 包裝;5g 皮質(zhì)類固醇結(jié)合球蛋白試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口 包裝;25g 皮質(zhì)醇試劑盒 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR 包裝;5g 阿留申病病毒PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格 Corynebacterium pseudodiphtheriticum 中文名稱:假百喉棒桿菌種屬:Corynebacterium pseudodiphtheriticum分離基物:人的喉嚨,美國(guó)紐約安全等級(jí):1模式菌株:yes培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:114生長(zhǎng)條件:37℃ 純度:≥99% Leuconostoccitreum 中文名稱:檸檬色明串珠菌種屬:Leuconostoccitreum分離基物:Honeydewofryeear安全等級(jí):1模式菌株:yes培養(yǎng)方法生長(zhǎng)條件:26℃ 純度:≥99% Pediococcusdamnosus 中文名稱:有害片球菌種屬:Pediococcusdamnosus分離基物:拉格啤酒酵母安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:質(zhì)量控制菌株培養(yǎng)方法生長(zhǎng)條件:26℃ 純度:98% Leuconostoc pseudomesenteroides 中文名稱:假腸膜明串珠菌腸種屬:Leuconostoc pseudomesenteroides安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法生長(zhǎng)條件:26℃ 純度:98% Providenciaalcalifaciens 中文名稱:產(chǎn)堿普羅威登斯菌種屬:Providenciaalcalifaciens安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:質(zhì)量控制菌株培養(yǎng)方法生長(zhǎng)條件:37℃ 純度:98% Actinobacillusureae 中文名稱:脲放線桿菌種屬:Actinobacillusureae分離基物:Noseswab安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:35生長(zhǎng)條件:37℃ 純度:≥97% Agrobacteriumrhizogenes 中文名稱:發(fā)根土壤桿菌種屬:Agrobacteriumrhizogenes安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:研究、教學(xué)用菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:2生長(zhǎng)條件:30℃ 純度:98% Staphylococcuscohniisubsp.urealyticus 中文名稱:科氏葡萄球菌解脲亞種種屬:Staphylococcuscohniisubsp.urealyticus分離基物:人類皮膚安全等級(jí):1模式菌株:yes培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:109生長(zhǎng)條件:37℃ 純度:98% 反應(yīng)五要素: 參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則: ①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。 ②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。 ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。 ⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。 ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。 ⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。 引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。 技術(shù)原理: DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。 在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性) 產(chǎn)品僅用于科研發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。 |