特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 馬內(nèi)菲青霉探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Penicillium marneffei | 貨號 | YSP97059 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 血管舒張劑激活蛋白(VASP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 厚垣鐮孢菌 5g 神經(jīng)疾病靶標酯酶(NTE)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 灰紅鏈霉菌 100mg 整合素αV(ITGαV)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 皮氏羅爾斯通氏菌 1g 基質(zhì)重塑關(guān)聯(lián)蛋白5(MXRA5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 短小芽孢桿菌 250mg 斯鈣素1(STC1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 固氮菌 1g Klotho蛋白(KL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 蠟狀芽孢桿菌 5g 層黏連蛋白受體1(LAMR1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 90% 環(huán)棱褐孔菌 100g 心營養(yǎng)素樣細胞因子1(CLCF1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 90% 殼菌 25g 細胞骨架活性調(diào)節(jié)蛋白(ARC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 90% 谷氨酸棒桿菌 5g 生長分化因子3(GDF3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 活潑微球菌 1g 生長分化因子3(GDF3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 翹鱗香菇 25g 多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白(DAT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 鏈格孢 5g 異檸檬酸脫氫酶1(IDH1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 白腐菌 1g 骨髓基質(zhì)細胞抗原2(BST2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 粘絲膜菌 100g 膜鐵轉(zhuǎn)運蛋白(FPN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 霍氏格里蒙特氏菌 25g Ⅳ型膠原α3(COL4α3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 美澳型核果褐腐病菌 500g 原鈣黏素15(PCDH15)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 好食脈孢菌 100g 銅伴侶超氧化物歧化酶(SOD4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 動物雙歧桿菌 25g 馬內(nèi)菲青霉探針法熒光PCR檢測試劑盒細胞分裂周期蛋白2亞型1抗體Rabbit Meiiones Unguiculataus Milme-Edwauds Whole serum 兔抗長爪沙鼠IgG抗血清300 ul 20號染色體開放閱讀框74抗體Donkey human IgG Whole serum 驢抗IgG抗血清100µg 促腎上腺皮質(zhì)釋放激素受體2抗體Donkey rabbit IgG Whole serum 驢抗兔IgG抗血清300 ul 20號染色體開放閱讀框132抗體Donkey Goat IgG Whole serum 驢抗羊IgG抗血清300 ul IV型膠原蛋白/4型膠原蛋白/膠原蛋白4抗體Donkey Guinea IgG Whole serum 驢抗豚鼠IgG抗血清300 ul 煙型酰膽受體B2抗體AGEs (advanced glycosylation end products) 晚期糖基化終末產(chǎn)物蛋白300 ul 20號染色體開放閱讀框70抗體AGEs control article(advanced glycosylation end products control article) 晚期糖基化終末產(chǎn)物蛋白對照品300 ul 親環(huán)蛋白(親環(huán)素)PPIB抗體Proin and Peptide 蛋白質(zhì)與多肽100 ul 8號染色體開放閱讀框34抗體BSA (bovine serum albumin) 牛血清白蛋白300 ul |