特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途! 產品名稱 | 大片吸蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Fasciola gigantica | 貨號 | YSP96707 |
熒光染料的優點: 產品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發出熒光。檢測到的熒光分子數與PCR產物的數量成正比,因此,根據PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態性以及根據SNP區別和定量菌株。 PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數形式增加的,隨著反應循環數的增加,終PCR反應不再以指數形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產物已不再呈指數級的增加,PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據終的PCR產物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環,收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化。而在平臺期,擴增產物已不再呈指數級的增加,PCR 的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據終的 PCR 產物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數。只有在熒光信號指數擴增階段, PCR產物量的對數值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 磺間二甲氧嘧啶鈉(標準品)Phospho-cdc25C (Ser216) (63F9) Rabbit mAb2-氟-6-溴 毛地黃毒苷配基Phospho-cdc25C (Ser216) (63F9) Rabbit mAb2-氟-6-甲 柯諾辛PI4 Kinase Antibody(S)-1-BOC-2-哌甲酸甲酯 烏拉地爾(標準品)Nanog (D73G4) XP® Rabbit mAb溴-氟甲 夫西地酸鈉Nanog (D73G4) XP® Rabbit mAb2-甲基-5-溴甲酸甲酯 夫西地酸鈉(標準品)Stat3 (79D7) Rabbit mAb6-溴吲唑 3,5-二-L-酪氨酸Stat3 (79D7) Rabbit mAb對十二烷基磺酰疊氮 氟氯西林鈉(標準品)Ezh2 Antibody四溴雙酚 A 巴利森苷A;派立辛LAMP2 (D5C2P) Rabbit mAb1-羥基并三唑一水物 山楂酸,馬斯里酸Hamartin/TSC1 Antibody二-聯共晶 2-基并咪唑-5-磺酸,紫外線吸收劑 UV-TPhospho-Stat3 (Ser727) (D8C2Z) Rabbit mAb (Biotinylad)異基酸 毛萼乙素Mouse (MOPC-21) mAb IgG1 Isotype Control (APC Conjuga)雙酚 A 知母皂苷元53BP1 (P550) Antibody二二氯硅烷 4'-去甲鬼臼毒素Tri-Methyl-Histone H3 (Lys36) (D5A7) XP® Rabbit mAb過氧化氫異 杠柳毒苷Tri-Methyl-Histone H3 (Lys36) (D5A7) XP® Rabbit mAb多聚酸 1,2-二亞油酰甘油Phospho-Wee1 (Ser642) (D47G5) Rabbit mAb2-甲酰基-氧代酸乙酯 基-N-乙酰-β-D-氨基半糖苷Phospho-Wee1 (Ser642) (D47G5) Rabbit mAb2-蒎 2-溴咪唑并[1,2-a]吡Phospho-YAP (Ser127) Antibody甲基酸甲酯 大片吸蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒激活素受體1A抗體Bcl-xL/FITC 熒光素標記抗Bcl-xL蛋白抗體IgG100 ul 激活素受體2A抗體p-Bcl-xL(phospho-Ser62)/FITC 熒光素標記抗酸化(Ser62)Bcl-xL蛋白抗體IgG20 ul 激活素受體2B抗體Phospho-Bcl-2 (p-Thr56) /FITC 熒光素標記兔抗、大、Bcl-2抗體IgG100 ul 2號染色體開放閱讀框88抗體Phospho-Bcl-2 (p-Ser70) /FITC 熒光素標記兔抗、大、Bcl-2抗體IgG100 ul G蛋白偶聯受體ARHGEF18抗體Bcl-6/Bcl-5/FITC 熒光素標記兔抗、大、原癌基因Bcl-6抗體IgG100 ul 激活素受體1B抗體Bcl-10/CLAP/FITC 熒光素標記兔抗、大、Bcl-10抗體IgG20 ul 雄激素受體相關蛋白24抗體Bcl-10(phospho Ser218)/FITC 熒光素標記兔抗、大、Bcl-10抗體IgG100 ul 淀粉樣肽前體蛋白抗體(C端)Bcr/CD3D/FITC 熒光素標記兔抗、大、T淋巴細胞受體抗體IgG100 ul 腺苷酸環化酶2抗體Phospho-Bcr(p-Tyr177)/FITC 熒光素標記兔抗、大、T淋巴細胞受體抗體IgG100 ul |