產(chǎn)品名稱：鷹嘴豆中間根瘤菌
貨號：YS-01J12886
拉丁文: Mesorhizobium ciceri

提供形式: 凍干物

安全等級: 1

模式菌株: yes

應(yīng)用領(lǐng)域: 模式菌株

培養(yǎng)基: 根瘤菌培養(yǎng)基：酵母提取物 1.0 g，甘露醇 10.0 g，土壤提取液 200 ml，瓊脂 15.0 g，蒸餾水 800 ml，pH 7.2，土壤提取液：土壤50克，加水200ml 121℃蒸煮1小時，過濾后加水補足到200ml。

生長條件: 28℃，好氧

存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

公司產(chǎn)品僅用于科研培養(yǎng)及打管說明：

1、安瓿瓶開封：用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復(fù)培養(yǎng)：用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中，并在建議的條件下培養(yǎng)。

3、注意事項：菌種活化前，請將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，延遲期較長，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長

4、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng)，有時母瓶種子也可以直接進罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

REG4/RELP  再生基因蛋白4抗體雷帕霉素靶蛋白抗體

Reg3a  胰島β生長因子抗體粘蛋白-2/上皮膜抗原2抗體

Reg3 gamma  胰島β生長因子Reg IIIγ抗體粘蛋白4抗體

Reg3 beta  胰島β生長因子Reg IIIα 抗體v-maf 肌腱膜纖維肉瘤癌基因同源物A抗體

REG1β/REG1 beta  胰島再生因子β抗體基質(zhì)金屬蛋白酶-10抗體

REG1A  胰島再生因子ICRF抗體突變型P53抗體

REF-1/APEX1  多功能DNA修復(fù)酶抗體蜜蜂微孢子蟲蛋白抗體

REEP5  受體表達蛋白5/息肉相關(guān)蛋白抗體基質(zhì)金屬蛋白酶-24抗體

RED/CSA2  軟骨肉瘤相關(guān)蛋白2抗體巨噬甘露糖受體抗體

RECQL5  RecQ解旋酶樣蛋白5抗體胃粘液素抗體

RECQL5  RecQ解旋酶樣蛋白5抗體基質(zhì)金屬蛋白酶20抗體

recPEP  重組豬乙腦病結(jié)構(gòu)蛋白抗體尿調(diào)節(jié)蛋白抗體

RECK  金屬蛋白酶抑制因子RECK抗體肌增強因子2抗體

REC8  減數(shù)分裂重組蛋白家族REC8抗體肌原調(diào)節(jié)蛋白抗體

RDH13  視黃脫氫酶13抗體神經(jīng)母特異性轉(zhuǎn)移因子抗體
鷹嘴豆中間根瘤菌菌種傳代亮白曲霉酪氨酸蛋白激酶A5受體抗體 Lecithin from egg 質(zhì)量規(guī)格：BR

孢絲蓋傘上皮鈉離子通道蛋白γ/γENaC抗體 Vilanterol;GW642444 質(zhì)量規(guī)格：>98%,吸入型長效β2激動劑

橄欖色鏈霉菌癌基因ETS2抗體 PD-98059 質(zhì)量規(guī)格：>98%,MEK抑制劑

側(cè)耳內(nèi)皮素3抗體 PLX-4720 質(zhì)量規(guī)格：>98%，B-RafV600E抑制劑

華麗側(cè)耳（佛羅里達側(cè)耳）磷酸化外信號調(diào)節(jié)激酶5抗體 1,1'-Carbonyldiimidazole 質(zhì)量規(guī)格：>98%

滑菇磷酸化外信號調(diào)節(jié)激酶5抗體 LY2835219 質(zhì)量規(guī)格：>98%，CDK4 和CDK6選擇性抑制劑

野梧桐歐文氏菌外信號調(diào)節(jié)激酶4抗體 LEE011 質(zhì)量規(guī)格：>98%,高度特異性CDK4/6抑制劑

松口蘑腸出血性大腸桿菌埃希氏菌O157:H7抗體 MG-132 質(zhì)量規(guī)格：>98%，proteasome抑制劑
微生物培養(yǎng)方法：

1、平板劃線分離法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面，通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落。

2、稀釋涂布平板法將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。

上述兩種方法雖然都可以實現(xiàn)觀察菌落特征的目的，但平板劃線分離法不能對菌落計數(shù)，而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過程復(fù)雜，對平板的要求比較高，可參照以下步驟：

a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃，向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均勻，然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿，輕輕搖動培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部，待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。

b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g，放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖15～20min混合均勻，用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻，制成活性污泥混合液。

c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置，用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴展，使之分布均勻。