產品名稱：金龜子綠僵菌小孢變種 斜面
貨號：YS-01J13259
拉丁文: Metarhizium anisopliae var. anisopliae

提供形式: 斜面

安全等級: 1

模式菌株: no

應用領域: 生物防治

培養基: 綜合PDA：馬鈴薯煮汁1000mL， 3.0g，七水硫酸鎂 1.5g，葡萄糖 20.0g，維生素B1 10mg，瓊脂 20g，pH自然。馬鈴薯煮液：200g馬鈴薯，去皮，切塊，放入蒸餾水中煮沸30min，取濾液定容至1000mL,備用。121℃，15min。

生長條件: 25-28℃，好氧

公司產品僅用于科研培養及打管說明：

1、安瓿瓶開封：用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復培養：用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養基，滴入安瓿管內，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養基試管中，并在建議的條件下培養。

3、注意事項：菌種活化前，請將安瓿管保存在6-10℃的環境下，某些菌種經過冷凍干燥保存后，延遲期較長，需要連續兩次繼代培養才能正常生長

4、復蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復蘇后需保藏的斜面應于4℃中保藏。

微生物菌種的培養：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養基，培養基中含有一些適合產孢子的營養成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養環境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養可直接或間接誘導孢子形成。面的培養溫度大多數為28 ℃，少數為37 ℃，培養時間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農產品為培養基。這是由于這些農產品中的營養成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養一般為25～28 ℃，培養時間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養，有時母瓶種子也可以直接進罐。種子培養基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養成分不宜過濃，子瓶培養基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養基配方。

保存方法：

傳代保存法：培養基的濃度不宜過高，營養成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應在可能的范圍內盡量降低。培養溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產酸菌種，則應在培養基中添加少量碳酸鈣 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數年。本法應注意避免水分的蒸發。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內，再放入低溫冰箱內進行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內，再置于冰箱內進行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

微生物培養方法：

1、平板劃線分離法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環圈在平板培養基表面，通過分區劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞，經培養后生長繁殖成單菌落。

2、稀釋涂布平板法將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養基的表面進行培養，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養基表面形成單個菌落。

上述兩種方法雖然都可以實現觀察菌落特征的目的，但平板劃線分離法不能對菌落計數，而稀釋涂布平板法培養過程復雜，對平板的要求比較高，可參照以下步驟：

a、制備平板培養基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養基加熱溶化并冷卻至65℃，向氯化鈉蔗糖瓊脂培養基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均勻，然后取20ml混合均勻的培養基溶液倒入培養皿，輕輕搖動培養皿，使培養基溶液均勻分布在培養皿底部，待培養基溶液凝固后即得平板培養基。

b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g，放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖15～20min混合均勻，用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻，制成活性污泥混合液。

c、培養基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培養基表面的中央位置，用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴展，使之分布均勻。

Egr1  早期生長應答蛋白1抗體橋粒斑蛋白1抗原

EGFRvIII  表皮生長因子受體III型突變體抗體蓬亂蛋白1

EGFR5/CLEC14A  表皮生長因子受體5抗體鳥苷三磷酸酶－發動蛋白2抗體

EGFR  表皮生長因子受體抗體發育調節蛋白多肽抗原

EGFR  表皮生長因子受體抗體轉錄因子E2F-1

EGFP  重組增強型綠色熒光蛋白抗體轉錄因子E2F-2抗原

EGFL8  表皮生長因子樣蛋白8抗體轉錄因子E2F-4抗原

EGFL7  類表皮生長因子域7抗體轉錄因子E2F-6抗原

EGF(mouse)  表皮生長因子抗體（小鼠）E2 tag多肽抗原

EGF(human)  表皮生長因子抗體（人）膠質谷氨酸運載蛋白3抗原

EGF  小鼠抗表皮生長因子抗體EB病編碼核蛋白-3

EGF  抗表皮生長因子抗體內皮素轉化酶1抗原

EGF  表皮生長因子抗體（大鼠）內皮素轉化酶2抗原

EGF  表皮生長因子抗體嗜酸性粒陽離子蛋白抗原

EFR3A  EFR3A蛋白抗體外胚層發育不良抗原
金龜子綠僵菌小孢變種 斜面 規格微紅微球菌λ輕鏈抗體 N6-Benzyl-5'-ethylcarboxamido Adenosine  質量規格：>98%,BR

根瘤菌屬溶酶體相關膜蛋白2抗體 P1,P5-Di(adenosine-5') pentaphosphate pentasodium salt  質量規格：>99%,BR

糞產堿菌糞亞種肺腺瘤易感蛋白2抗體 P1,P5-Di(adenosine-5') pentaphosphate pentaammonium salt 質量規格：> 95%,BR

異常畢赤酵母磷酸化RNA聚合酶相關蛋白LEO1抗體 N6-Benzyl Adenosine  質量規格：>98%,BR

大腸埃希氏菌腫瘤抑制基因LATS2抗體 Adenosine Kinase Inhibitor 質量規格：>99%,BR

氣生馬賽菌磷酸化白F肌動蛋白結合蛋白抗體 2-Amino Adenosine 質量規格：>99%,BR

褐橙指孢囊菌磷酸化腫瘤抑制基因LATS2抗體 5'-Ethylcarboxamido-2',3'-isopropylidene Adenosine 質量規格：>98.5%,BR

鴨疫里氏桿菌磷酸化白F肌動蛋白結合蛋白抗體 Allopurinol riboside 質量規格：>96.5%,工業級