熒光染料的優點: 產品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途! 產品名稱 | 肝胰腺壞死性細菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Necrotizing Hepatopancreatitis Bacterium(NHPB) | 貨號 | YSP96992 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發出熒光。檢測到的熒光分子數與PCR產物的數量成正比,因此,根據PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態性以及根據SNP區別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環,收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化。而在平臺期,擴增產物已不再呈指數級的增加,PCR 的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據終的 PCR 產物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數。只有在熒光信號指數擴增階段, PCR產物量的對數值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 Flk-1/KDR/VEGFR2 濃縮液 0.1ml 進口分裝 Uromucoid 英文名稱: 尿調節蛋白抗體 0.1ml CCL15 英文名稱: 巨噬細胞炎性蛋白15 0.1ml Anti-BIN1 橋連整合因子蛋白抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml EMR1 英文名稱: 表皮生長因子樣激素受體1 0.2ml 腱糖蛋白-C抗體 anti-Tn-C 0.2ml Anti-TNF- Alpha /HRP 辣根過氧化物酶標記鼠抗人壞死因子-α單克隆抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml C16orf7 英文名稱: 16號染色體開放閱讀框7抗體 0.2ml ELISA試劑盒英文名稱:Rat leukotriene E4,LT-E4 ELISA Kit* 大鼠白細胞活化黏附因子香receptor,PROGR ELISA Kit 大鼠載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA試劑盒 進口/原裝 英文名稱: Rat apoprotein A1,apo-A1 ELISA Kit 大鼠載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒 進口/原裝 英文名稱: Rat apoprotein B100,apo-B100 ELISA Kit 雞補體3裂解產物(C3SP)ELISA試劑盒英文名稱:Chicken Complement 3 split product,C3SP ELISA Kit 進口/分裝 雞層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒 英文名稱:Chicken Laminin,LN ELISA Kit 進口/原裝 雞傳染性鼻炎抗體(IC)ELISA試劑盒英文名稱:Chicken infectious coryza,ic ELISA Kit* 雞促黃體激素(LH)ELISA試劑盒英文名稱:Chicken Luteinizing Hormone,LH ELISA Kit進口/分裝 雞促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒英文名稱:Chicken follicle-stimulating hormone,FSH ELISA Kit * 雞催乳素(PRL)ELISA試劑盒英文名稱:Chicken prolactin,PRL ELISA Kit進口/原裝 人E-選擇素G98T基因多態性檢測試劑盒(PCR-RLFP)低溫運輸,-20℃保存50T 人Dectin-1基因PCR檢測試劑盒低溫運輸,-20℃保存50T 人CYP17基因多態性檢測試劑盒(PCR-RLFP)低溫?Anti-NSE 神經元特異性烯醇化酶抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml FS(Human Follistatin) ELISA Kit 人卵泡抑素Multi-class antibodies規格: 48T Anti-Phospho-LIMK1 (Thr508)/LIMK2 (Thr505) 酸化單絲氨酸蛋白激酶1/2抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml Rhesus antibody Rh KLK12 激肽釋放酶12抗體 規格 0.1ml 6-keto-PGF1a(Human 6-keto-prostaglandin F1a) ELISA Kit 人6酮前列腺素F1a 96T PTGEs 英文名稱: 前列腺素E合成酶抗體 0.1ml 真核翻譯啟動因子4A 單克隆抗體eIF4A1 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 纖維連接蛋白 單克隆抗體Fibronectin Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul GST 單克隆抗體GST Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul Cleaved PARP 單克隆抗體Cleaved PARP Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul α骨骼肌肌動蛋白 單克隆抗體α skeletal muscle actin Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul β II 微管蛋白 單克隆抗體β II tubulin Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 肝胰腺壞死性細菌探針法熒光PCR檢測試劑盒酸化細胞分裂周期蛋白25抗體TNF-alpha/ TNF- Alpha /FITC 熒光素標記鼠抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體 IgG100 ul 后期促進復合蛋白3抗體TNF- Beta/FITC 熒光素標記腫瘤壞死因子-β抗體IgG100 ul 酸化CRK抗體TNFAIP1/FITC 熒光素標記腫瘤壞死因子α誘導蛋白1抗體IgG100 ul 鈣粘蛋白6抗體TNFAIP3 /FITC 熒光素標記兔抗、大、腫瘤壞死因子α誘導蛋白3抗體IgG100 ul 鈣粘蛋白23抗體TNFSF14/LIGHT/CD258/FITC 熒光素標記腫瘤壞死因子配體超家族成員14抗體IgG100 ul 小腦變性相關蛋白2抗體TNFSF4/CD252/FITC 熒光素標記腫瘤壞死因子配體超家族成員4抗體IgG1 Kit 細胞分裂周期2相關蛋白激酶7抗體TNFSF18/GITR Ligand/FITC 熒光素標記腫瘤壞死因子配體超家族成員18抗體IgG100 ul A型產氣莢膜梭菌(魏氏梭菌)TNF- Alpha /HRP 辣根過氧化物酶標記腫瘤壞死因子抗體IgG20 ul 酸化細胞角蛋白18抗體TNF- Alpha /HRP 辣根過氧化物酶標記鼠抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體IgG100 ul PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數形式增加的,隨著反應循環數的增加,終PCR反應不再以指數形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產物已不再呈指數級的增加,PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據終的PCR產物量不能計算出初始模板量。 |