微生物菌種的培養：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養基，培養基中含有一些適合產孢子的營養成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養環境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養可直接或間接誘導孢子形成。面的培養溫度大多數為28 ℃，少數為37 ℃，培養時間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農產品為培養基。這是由于這些農產品中的營養成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養一般為25～28 ℃，培養時間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養，有時母瓶種子也可以直接進罐。種子培養基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養成分不宜過濃，子瓶培養基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養基配方。

產品名稱：頂青霉
貨號：YS-01J13443
拉丁文: Penicillium corylophilum

分離基物: 雙望分劃鏡

提供形式: 凍干物

安全等級: 1

模式菌株: no

應用領域: 光學儀器生霉試驗菌；纖維素酶

培養基: 綜合PDA：20%馬鈴薯汁1L，葡萄糖20g ，KH2PO4 3g， MgSO4.7H2O 1.5g，硫胺素微量，瓊脂 15g，pH 自然。

生長條件: 25-28℃，好氧

存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

公司產品僅用于科研培養及打管說明：

1、安瓿瓶開封：用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復培養：用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養基，滴入安瓿管內，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養基試管中，并在建議的條件下培養。

3、注意事項：菌種活化前，請將安瓿管保存在6-10℃的環境下，某些菌種經過冷凍干燥保存后，延遲期較長，需要連續兩次繼代培養才能正常生長

4、復蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復蘇后需保藏的斜面應于4℃中保藏。

保存方法：

傳代保存法：培養基的濃度不宜過高，營養成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應在可能的范圍內盡量降低。培養溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產酸菌種，則應在培養基中添加少量碳酸鈣 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數年。本法應注意避免水分的蒸發。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內，再放入低溫冰箱內進行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內，再置于冰箱內進行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

微生物培養方法：

1、平板劃線分離法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環圈在平板培養基表面，通過分區劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞，經培養后生長繁殖成單菌落。

2、稀釋涂布平板法將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養基的表面進行培養，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養基表面形成單個菌落。

上述兩種方法雖然都可以實現觀察菌落特征的目的，但平板劃線分離法不能對菌落計數，而稀釋涂布平板法培養過程復雜，對平板的要求比較高，可參照以下步驟：

a、制備平板培養基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養基加熱溶化并冷卻至65℃，向氯化鈉蔗糖瓊脂培養基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均勻，然后取20ml混合均勻的培養基溶液倒入培養皿，輕輕搖動培養皿，使培養基溶液均勻分布在培養皿底部，待培養基溶液凝固后即得平板培養基。

b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g，放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖15～20min混合均勻，用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻，制成活性污泥混合液。

c、培養基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培養基表面的中央位置，用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴展，使之分布均勻。

兔細絲蛋白A(FLNα)骨抑制素，人磷酸肌磷脂酶PLCZ1抗體

兔肝臟/紅酮酸激酶(PK)骨抑制素（1-5）酰，人，，狗，大鼠，小鼠，兔，馬磷脂酸磷酸酶2b抗體

兔白血病抑制因子(LIF)骨抑制素酰，人磷酸化端粒酶結合蛋白P23抗體

兔氧化低密度脂蛋白(OxLDL)p60 v-結構域（137-157）磷酸二酯酶5A抗體

兔叢生蛋白(CLU)p60 C-結構域底物ⅠLys(生物素)節律抑制蛋白PER1抗體

兔粒趨化蛋白2(GCP-2)垂體腺苷酸環化酶激活肽-27，人，小鼠，綿羊，豬，大鼠節律蛋白2抗體

兔中間α球蛋白抑制因子H4(ITIH4)垂體腺苷酸環化酶激活肽-27（6-27），人，雞，小鼠，豬，大鼠線粒體蛋白酪氨酸磷酸酶1抗體

兔C-肽(C-P)垂體腺苷酸環化酶激活肽-38（16-38），人，雞，小鼠，綿羊，豬，大鼠蛋白酶體復合物C5抗體

兔補體因子D(CFD) 垂體腺苷酸環化酶激活肽相關肽（1-29），大鼠重組豬乙腦病結構蛋白抗體

兔普列克底物蛋白同源物樣結構域家族A成員2(PHLDA2)胰多肽，人磷酸甲羥戊酸激酶抗體

兔微管蛋白α3C(TUBα3C)胰多肽，大鼠Phocein蛋白抗體

兔γ1肌動蛋白(ACTG1)甲狀旁腺激素（1-38），人蛋白酶體PSMα4/20S Proteasome α4抗體

兔腫瘤特異生長因子/腫瘤相關因子(TSGF)五肽胃泌素朊病/感染性蛋白抗體

兔過氧化還原酶5(PRDX5)肽YY，人4-磷酸磷脂酰肌5激酶1樣蛋白抗體

兔半胱氨酸蛋白酶抑制劑(CSTA)肽YY，犬，大鼠，小鼠，豬磷酸化磷脂酰肌激酶PIK3-γ抗體

兔嗜環蛋白/親環素D(CYPD)  磷脂酶A2激活肽B淋巴白血病前體蛋白轉錄因子1抗體
頂青霉規格污黑腐皮殼特異性核苷酸果糖β抗體

蠟樣芽孢桿菌11號染色體開放閱讀框73抗體

類諾卡氏菌屬磷酸乙轉移酶A抗體

多粘類芽胞桿菌前列環素受體抗體

釀酒酵母原鈣粘蛋白7抗體

大腸埃希菌過氧化物酶膜蛋白1抗體

釀酒酵母橋粒斑菲素蛋白2抗體

鏈格孢屬胞粘蛋白結合調節蛋白抗體