熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 枝頂孢霉探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Acremonium strictum | 貨號 | YSP96333 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實(shí)驗(yàn)時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強(qiáng)度信號,這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 泊甙(進(jìn)分)C17H19-氯代正戊烷 泊甙C16H12O6氯代十四烷 泊甙(標(biāo)準(zhǔn)品)C22H22O11(氯基)*氧基硅烷 依西美坦(企標(biāo))C24H32O61,二氯四甲基二硅氧烷 醋酸艾塞那肽C23H28O6氯乙烷 非那雄胺C30H32O9反-1,2-環(huán)己二胺 非那雄胺(標(biāo)準(zhǔn)品)C38H54O19(巰基基)*氧基硅烷 氟羅沙星C15H10O7甲氧基氯化三苯 氟羅沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)C17H26O41,10-二氨基癸烷 氟胞嘧啶/5-氟胞嘧啶C12H14O21,7-二氨基庚烷 氟胞嘧啶/5-氟胞嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)C6H13,12-二氨基十二烷 氟比洛芬(國產(chǎn))C15H20O2二苯甲酰 氟比洛芬(進(jìn)口)C28H34O9二叔戊酰 氟比洛芬(標(biāo)準(zhǔn)品)C60H102O29二基硅烷 磷霉素鈣(水溶)C21H22O9正辛基三氯硅烷 磷霉素鈉C15H18O22,2-二甲基戊烷 加替沙星C15H20O22,2-二甲基己烷 加替沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)C15H20O32,二甲基丁烷 枝頂孢霉探針法熒光PCR檢測試劑盒豬N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA試劑盒ADM (ProAM-N20) 腎上腺髓質(zhì)素抗體(N端20肽)100 ul 豬Na+/K+-ATP酶(Na/K ATPase)ELISA試劑盒ADM R 腎上腺髓質(zhì)素受體抗體100 ul 豬L-乳酸脫氫酶(L-LDH)ELISA試劑盒ADNP/NAP 活性依賴的神經(jīng)保護(hù)肽抗體100 ul 豬E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA試劑盒ADORA3 腺苷受體A3抗體100 ul 豬D-乳酸脫氫酶(D-LDH)ELISA試劑盒ADO 2-氨基乙硫醇雙加氧酶抗體1 Kit 豬D二聚體(D2D)ELISA試劑盒Integrin Alpha V 整合素αV抗體400 ul 豬C肽(C-Peptide)ELISA試劑盒ADRA2 ADRA2腎上腺素能受體2抗體400 ul 豬C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒ADRB1 腎上腺素能受體β1抗體400 ul 豬c-fos ELISA試劑盒ADRB2 腎上腺素能受體β2抗體100 ul PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 |