樣品RNA的抽提: ①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。 產品名稱 | 腦粘體蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Myxosoma cerebralis | 貨號 | YSP96989 |
實驗過程: 一、試劑準備 1. DNA模板 2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。 3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術: 本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環形凸起,兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析,提供實驗報告給您。 Cathepsin B 英文名稱: 組織蛋白酶B抗體 0.1ml Anti-Phospho-Cas (Tyr165) 酸化細胞凋亡敏感性基因Multi-class antibodies規格: 0.1ml TSGF(Tumor Specific Growth Fanctor) 惡性特異性生長因子抗原Multi-class antibodies規格: 0.5mg Anti-CT-1/CTF1 心肌營養素1抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml Rhesus antibody Rh PDCD7 凋亡相關蛋白7抗體 規格 0.2ml IGF1R Kit Human 人 IGF1R / CD221 / CD221 ELISA配對抗體 ELISA THAP1 英文名稱: 核凋亡因子THAP1抗體 0.2ml C15orf62 英文名稱: 15號染色體開放閱讀框62抗體 0.2ml Anti-IL-31RA/CRL3 白介素31受體a抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml Human glycosylated serum protein,GSP ELISA Kit 人糖化蛋白Multi-class antibodies規格: 48T Anti-SDF-1/CXCL12 基質細胞衍生因子-1抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml Rhesus antibody Rh GPSM2 G蛋白信號調節蛋白2抗體 規格 0.2ml sIgA ELISA Kit 大鼠分泌型免疫球蛋白A 96T phospho-ODF2(Ser796) 英文名稱: 酸化尾部結構蛋白抗體 0.1ml 組蛋白H3 (Di Methyl Lys27) 單克隆抗體(1A8)Histone H3 (Di Methyl Lys27) Monoclonal Antibody(1A8)700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 組蛋白H3 (Mono Methyl Lys79) 單克隆抗體(4C9)Histone H3 (Mono Methyl Lys79) Monoclonal Antibody(4C9)700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 組蛋白H3 (Tri Methyl Lys4) 單克隆抗體(2E11)Histone H3 (Tri Methyl Lys4) Monoclonal Antibody(2E11)700/30ul#1540/100ul#2520/200ul Free Tri-iodothyronine Indes,Free-T3 ELISA Kit 大鼠胰蛋白酶(trypsin)ELISA試劑盒 英文名稱:Rat trypsin ELISA Kit* 大鼠胰蛋白酶原激活肽(TAP)ELISA試劑盒英文名稱:Rat trypsinogen activation peptide,TAP ELISA Kit* 大鼠胰島素(INS)ELISA試劑盒英文名稱:Rat Insulin,INS ELISA Kit* 大鼠胰島素受體β(ISR-β)ELISA試劑盒英文名稱:Rat Insulin Receptor β,ISR-β ELISA Kit進口/分裝 大鼠胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒英文名稱:Rat Insulin-like growth factor 1,IGF-1 ELISA Kit* 大鼠胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISA試劑盒英文名稱:Rat Insulin-like growth factor 2,IGF-2 ELISA Kit進口/原裝 人白血病Major-BCR-ABL融合基因PCR檢測試劑盒?CD15 單克隆抗體CD15 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul CD41 單克隆抗體CD41 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul CD25 單克隆抗體CD25 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 腦粘體蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒細胞壁合成蛋白43抗體TIMP-2/FITC 熒光素標記金屬蛋白酶組織抑制因子-2抗體IgG100 ul 19號染色體開放閱讀框29抗體TIMP-3/FITC 熒光素標記金屬蛋白酶組織抑制因子-3抗體IgG20 ul 酸化p21蛋白抗體TIMP-4/FITC 熒光素標記金屬蛋白酶組織抑制因子-4抗體IgG100 ul 酸化細胞周期檢測點激酶2抗體TIF1 Alpha/TRIM24/FITC 熒光素標記轉錄中介因子Tif1α抗體IgG100 ul 酸化鈣/鈣調素依賴蛋白激酶2α抗體TIF1 beta/KAP1/FITC 熒光素標記轉錄中介因子Tif1β抗體IgG100 ul 酸化周期素依賴性激酶2抗體Phospho-TIF1beta (Ser824)/FITC 熒光素標記酸化轉錄中介因子Tif1β抗體IgG100 ul 酸化細胞周期檢測點激酶1抗體TLK1/FITC 熒光素標記調節染色體組裝激酶1抗體IgG500 ul 酸化P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑抗體Phospho-TLK1 (Ser695)/FITC 熒光素標記酸化調節染色體組裝激酶1抗體IgG100 ul 酸化α-連環蛋白抗體TIF1 gamma/Trim33/FITC 熒光素標記轉錄中介因子Tif1γ抗體IgG20 ul |