熒光定量PCR試劑盒技術: 產品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環形凸起,兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析,提供實驗報告給您。 產品名稱 | 小孢子菌屬通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Microsporum spp. | 貨號 | YSP96920 |
樣品RNA的抽提: ①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。 實驗過程: 一、試劑準備 1. DNA模板 2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。 3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 ATAD2 英文名稱: 三酸腺苷酶家族蛋白2抗體 0.2ml Anti-EpCAM/CD326/FITC 熒光素標記上皮細胞特異性EpCAM/CD326蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml VK1 ELISA Kit 大鼠維生素K1Multi-class antibodies規格: 48T Anti-ADRA2/FITC 熒光素標記alpha-2腎上腺素能受體抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml Rhesus antibody Rh FECH/Ferrochelatase 鐵螯合酶抗體 規格 0.2ml HL ELISA Kit 大鼠肝脂酶 96T MYBPC1 英文名稱: 肌球蛋白結合蛋白C抗體 0.2ml BRCC3 英文名稱: 癌易感基因復合物亞基蛋白3抗體 0.2ml Anti-PTEN/MMAC1(NT) 一種抑制基因抗體(N端)Multi-class antibodies規格: 0.1ml LAM(Human Lipoarabinomannan) ELISA Kit 人脂阿拉伯甘露聚糖Multi-class antibodies規格: 48T Anti-PDGF Receptor alpha/PDGF-R-A 血小板源性生長因子受體-A抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml Rhesus antibody Rh HMGA1/HMG-I/HMG-Y 高遷移率族蛋白A1抗體 規格 0.2ml Apo A1(Human anti-apolipoprotein A1 antibody) ELISA Kit 人抗載脂蛋白抗體A1 96T PDHX 英文名稱: 酸脫氫酶復合物X蛋白抗體 0.2ml 卵脂吐溫80營養瓊脂250克Lecithin Tween 80 Nutrient Agar化妝品檢驗中細菌計數 酰胺瓊脂250克Acetamide Agar綠膿桿菌的選擇性分離培養 SCDLP液體培養基250克SCDLP Broth Medium化妝品檢驗中樣品制備、增菌 假單胞菌屬選擇瓊脂250克Cetrimide Agar用于綠膿桿菌的分離培養 普通瓊脂斜面培養基(PH8.0-8.2)250克Common Nutrient Agar一般細菌的培養,分離培養霍亂弧菌,埋迪霉菌鑒定用 PDP瓊脂250克King Medium A綠膿菌色素測定 小孢子菌屬通用探針法熒光PCR檢測試劑盒富含半胱氨酸與表皮生長因子樣蛋白2抗體OPGL/RANKL/CD254 /FITC 熒光素標記骨保護蛋白配體抗體IgG100 ul 細胞骨架相關蛋白2/腫瘤和微管相關蛋白抗體RANK/TNFRSF11A/CD265/FITC 熒光素標記核轉錄因子NF-κB受體抗體IgG1 Kit 染色質修飾蛋白4B(4C)抗體OPN/FITC 熒光素標記骨橋蛋白抗體IgG100 ul 酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體OPN/FITC 熒光素標記骨橋蛋白抗體IgG1 Kit 酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體ORX-A/FITC 熒光素標記增食欲素-A/欲激素AIgG100 ul 酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體Osx /FITC 熒光素標記成骨相關轉錄因子抗體IgG100 ul 酪蛋白激酶1γ2抗體Os05g/0477200 proin /FITC 熒光素標記抗水稻白葉枯病菌Os05g0477200蛋白抗體IgG100 ul 柯薩奇病毒蛋白受體B抗體OTR/FITC 熒光素標記縮宮素受體抗體IgG20 ul 腫瘤抑制因子FBW7抗體OVA/FITC 熒光素標記兔抗雞卵白蛋白/卵清蛋白抗體IgG100 ul |