熒光定量PCR試劑盒技術(shù): 產(chǎn)品僅用于科研本實用新型技術(shù)公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設(shè)有限位凸起,下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋,側(cè)蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起,兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿,固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側(cè)蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設(shè)計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實驗報告給您。 產(chǎn)品名稱 | 雞傳染性貧血病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Chicken Infectious Anemia Virus(CIAV) | 貨號 | YSP96535 |
樣品RNA的抽提: ①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質(zhì)量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 實驗過程: 一、試劑準備 1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設(shè)立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。 3.產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 N,N-二(standard for GC,≥99.5%(GC))Itk (2F12) Mouse mAb溴-甲氧基 十二烷(標準品)Phospho-IRS-1 (Ser307) Antibody氧雜環(huán)丁- 四(≥99.5% (GC))Phospho-IRS-1 (Ser307) Antibody(S)-(-)-1,2,3,四氫-異喹啉甲酸芐酯對甲磺酸鹽 鉍標準溶液(100mg/L,基體: 5%HNO3)IRS-1 AntibodyN-芐基-吡咯烷 鈹標準溶液(10μg/ml,基體:2%HCl)IRS-1 Antibody1-芐基-吡咯烷酮 銅標準溶液(1000μg/ml,基體:1.0 mol/L HNO3)CEA/CD66e (CB30) Mouse mAb2,二氯甲酰 銅標準溶液(100µg/mL,基體:1%HNO3)PathScan® Phospho-Btk (Tyr223) Sandwich ELISA kit3,二甲氧基酮 鈷標準溶液(1000μg/ml)BSCL2/Seipin (D3W8C) Rabbit mAb2-氯-5-硝基三氟甲 六價鉻標準溶液(1000μg/ml,溶劑:水)Phospho-IRS-1 (Ser302) Antibody溴-氟甲 鉺標準溶液(1000μg/ml,基體:1.0 mol/L HNO3)Phospho-IRS-1 (Ser1101) Antibody羥基甲酸乙酯 氟標準溶液(1.00μg/g,基體:0.1MH3BO3,K+2.2mg/L,Na+23mg/L,Ce-37mg/L)Phospho-IRS-1 (Ser1101) Antibody間三氟甲基肉桂酸 金標準溶液(100.0μg/g,基體: 0.5mol/L的HCl溶液)Phospho-IRS-1 (Ser612) Antibody2-肼基-5-溴吡啶 鉿標準溶液(1000μg/ml)p38 MAPK (D13E1) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)磺酰 銥標準溶液(1000μg/ml,基質(zhì):2.0mol/L鹽酸)PANK1 (D2W3N) Rabbit mAb4,5-二氟-2- 錳標準溶液(1000mg/L,溶劑:1%硝酸)Phospho-IRS-1 (Ser636/639) Antibody氯-氟三氟甲 鎂標準溶液(100µg/mL,基體:5%HCl)Phospho-IRS-1 (Ser789) Antibody6-羥基-2-萘甲 汞標準溶液(100µg/mL,基體: 3%HNO3)IRS-1 (59G8) Rabbit mAb乙炔環(huán)己 鎳標準溶液(500mg/L,溶劑:1%硝酸)Wnt3a Antibody氨基呋咱-羧酸 雞傳染性貧血病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒NADPH氧化酶1(/MOX1/)ELISA試劑盒phospho-ASK1(Ser967) 酸化細胞凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1抗體20 ul Na+/H+交換體3(NHE3)ELISA試劑盒phospho-ASK1(Thr845) 酸化細胞凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1抗體100 ul N1,N12-二乙?;?ELISA試劑盒Maspin 抑癌基因抗體100 ul N(ε)羧乙基賴氨酸(CEL)ELISA試劑盒MASP 甘露聚糖結(jié)合凝集素絲氨酸肽酶1抗體100 ul N -甲基- D -天冬氨酸抗體IgG(NMDA Antibody IgG)ELISA試劑盒MASP2 甘露聚糖結(jié)合凝集素絲氨酸肽酶2抗體100 ul MYC誘導核抗原(MINA)ELISA試劑盒Matriptase 蛋白裂解酶(一種新的癌基因)抗體100 ul MAX二聚化蛋白1(MXD1)ELISA試劑盒MBP 髓鞘性蛋白抗體100 ul MAP酸酶雙特異性酸酶1(DUSP-1)ELISA試劑盒CMV/HCMV PP65/HHV5 PP65 巨細胞病毒PP65/CMV低基質(zhì)脂蛋白抗體100 ul L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA試劑盒HCMV 巨細胞病毒20 ul |