客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR試劑盒技術：
產品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環形凸起，兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。
千金子二萜二乙酰甲酰酯（標準品）（二巰基亞甲基）-2-甲基-6-（對二甲氨基乙基）-4H-吡喃

羌活（標準品）2-甲基

10-羥基癸酸（標準品)三(二亞芐基酮)二鈀

羥基紅花黃色素A(標準品)羥基-2-丁酮

馬兜鈴酸A去甲基代謝產物甲氧基鹽酸鹽

羥基積雪草苷（標準品）2-溴-6-氯吡啶

羥基積雪草酸（標準品）溴-2-氟甲

羥基積雪草酸5-溴-2-氟甲

海柯皂苷元3,二氯甲酸

靈芝酸 B2(1H)-PYRIDINONE,5-CHLORO-FLUORO-(9CI)

去甲勞丹鹽酸鹽,四氫鹽酸鹽西米替汀

異夏佛塔苷1-芐基-5-氧-吡咯烷羧酸甲酯

氨甲酰甲膽；氯貝膽2-氨基-6-羥基吡啶

5-羥甲基糠（標準品）2-芐

茄尼（標準品）甲基二酸

大波斯菊苷,芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(標準品)氯-甲酸

秦皮苷（標準品）DL-對氟氨酸

秦皮甲素（標準品）乙二-1,1-二甲基乙縮溶液
壞死梭桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒ADP核糖基化樣因子8B抗體CEA /FITC  熒光素標記癌胚抗原抗體IgG100 ul

三酸腺苷酶家族蛋白2抗體CEBP- Alpha /CLEBP Alpha /FITC  熒光素標記轉錄調節因子C/EBP α 抗體IgG100 ul

AKIRIN1蛋白抗體Phospho-C/EBPbeta (Ser105) /FITC  熒光素標記兔抗、大、轉錄調節因子C/EBP β抗體IgG100 ul

錨定蛋白樣蛋白1抗體Phospho-C/EBPalpha (Ser21) /FITC  熒光素標記兔抗、大、轉錄調節因子C/EBP α 抗體IgG100 ul

腺苷酸激酶2抗體Phospho-C/EBPalpha (Thr222/226) /FITC  熒光素標記兔抗、大、轉錄調節因子C/EBP α 抗體IgG20 ul

頂體前體蛋白抗體C/EBP Beta/FITC  熒光素標記轉錄調節因子C/EBP β抗體IgG100 ul

黑色素瘤缺失樣蛋白1抗體Phospho-C/EBPbeta (Thr235) /FITC  熒光素標記兔抗、大、轉錄調節因子C/EBP β抗體IgG100µl

未知糖基化轉移酶AER61抗體PBK/TOPK/FITC  熒光素標記PDZ連接激酶/T-LAK細胞源蛋白激酶抗體IgG100µl

鐵蛋白Fe65抗體Phospho-PBK/TOPK (Thr9) /FITC  熒光素標記酸化PDZ連接激酶/T-LAK細胞源蛋白激酶抗體IgG500µl
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。