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問號鉤端螺旋體探針法熒光PCR檢測試劑盒

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更新日期:
2020-11-30
點擊次數(shù):
750
產(chǎn)品特點:
問號鉤端螺旋體探針法熒光PCR檢測試劑盒注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
  50次問號鉤端螺旋體探針法熒光PCR檢測試劑盒的詳細資料:

客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設(shè)計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實驗報告給您。

 產(chǎn)品名稱

問號鉤端螺旋體探針法熒光PCR檢測試劑盒

 英文名稱

 Leptospira interrogans

 貨號

 YSP96882

熒光定量PCR試劑盒技術(shù):
產(chǎn)品僅用于科研本實用新型技術(shù)公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設(shè)有限位凸起,下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋,側(cè)蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起,兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿,固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側(cè)蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
樣品RNA的抽提:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1)紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
1,2,4,5-四基(>98.0%(HPLC)(N))5-并呋喃-2-羧酸酯

四氟鄰二甲(>98.0%(GC))1-溴-2-甲氧基-

6-溴-2,二基萘(>98.0%(N))(S)-(+)-(1-基-1,1-二甲基)吡咯烷鹽

2,二基萘(>98.0%(GC))2,二甲基-6-氨基-2H-吲唑

1,二亞氨基并[f]異吲哚啉(>95.0%(N))N-(2-嘧啶-基)-N-甲基-2,二甲基-2H-吲唑-6-

2,二溴-6,7-二基萘(>98.0%(N))2,二甲基-6-硝基吲唑

2,二基-1,二羥基-5-硝基萘(>98.0%(HPLC)(N))甲基-6-硝基-1H-吲唑

1,2-萘二甲(>98.0%(GC))伊索克酸

2-氨基-4,5-二基-1H-咪唑(>97.0%(T))[(二甲基氨基)基]三基溴化物鹽

2,二基吡(>99.0%(GC))(S)-(1-甲酰基-1,1-二基)吡咯烷-L-鹽

4,5-二基咪唑(>98.0%(HPLC)(N))(S)-1-對甲磺酰基-(1-基-1,1-二甲基)吡咯烷

1,二氨基-2,二基-9,10-蒽醌(>90.0%(HPLC)(N))2-氨基-4,5-二氟甲酸甲酯

5-氨基-6--2,二基吡(>98.0%(GC)(N))溴-2-

5,6-二氨基-2,二基吡(>98.0%(N))2,5-二對二甲酸

5,6-二-2,二基吡(>98.0%(GC)(N))2-溴-6-酚

2,二基-5-甲基吡(>99.0%(GC))5-氟-2-甲酸

吡啶-2,二甲(>98.0%(GC))2-氟-5-甲酸

1,4,5,6-四氫-5,6-二氧-2,吡二甲(>98.0%(HPLC)(T))2-氟-6-酚
問號鉤端螺旋體探針法熒光PCR檢測試劑盒17號染色體開放閱讀框64抗體MKK7/FITC  熒光素標(biāo)記絲裂原活化蛋白激酶MKK7IgG100 ul

17號染色體開放閱讀框66抗體MARCO/FITC  熒光素標(biāo)記巨噬細胞清道夫受體抗體IgG100 ul

17號染色體開放閱讀框74抗體MASP/FITC  熒光素標(biāo)記抗MBL相關(guān)絲氨酸蛋白酶抗體IgG100 ul

17號染色體開放閱讀框75抗體MASP2/FITC  熒光素標(biāo)記甘露聚糖結(jié)合凝集素絲氨酸肽酶2抗體IgG100 ul

17號染色體開放閱讀框77抗體Matriptase/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗蛋白裂解酶抗體IgG100 ul

17號染色體開放閱讀框78抗體MATH1/FITC  熒光素標(biāo)記腸道分化干細胞MATH-1蛋白抗體IgG100 ul

維甲酸調(diào)節(jié)核基質(zhì)相關(guān)蛋白抗體Matrilin 1/CMP/FITC  熒光素標(biāo)記軟骨基質(zhì)蛋白抗體IgG100 ul

17號染色體開放閱讀框42抗體MBP/FITC  熒光素標(biāo)記髓鞘性蛋白抗體IgG20 ul

17號染色體開放閱讀框97抗體MBP/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記髓鞘性蛋白抗體IgG100 ul
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1(10pM)               2μl
      引物2(10PM)              2μ
      Taq酶(2U/μl)            1μl
      DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。

 

產(chǎn)品相關(guān)關(guān)鍵字: 問號鉤端螺旋體 探針法 熒光PCR檢測試劑盒
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