熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價(jià)格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性 非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問(wèn)題可以通過(guò)熔解曲線(xiàn) (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別,進(jìn)而通過(guò)PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩?lái)說(shuō),SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱(chēng) | 雙歧桿菌屬通用探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒 | 英文名稱(chēng) | Bifidobacterium spp. | 貨號(hào) | YSP96438 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為T(mén)aqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí),引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí),Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái),從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問(wèn)題,反應(yīng)結(jié)束后無(wú)需通過(guò)熔解曲線(xiàn)檢測(cè),縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計(jì)難度大; 只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類(lèi)基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱(chēng)TaqMan PCR,后來(lái)也叫Real-Time PCR,是美國(guó)PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán),收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào),這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號(hào)階段,熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線(xiàn)性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線(xiàn)性關(guān)系,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 纖維素酶(酶活>45 U/mg)Phospho-EphA2 (Tyr588) (D7X2L) Rabbit mAb芐基嗎啉-2-甲 氯化十六烷基吡啶一水(分子生物學(xué)級(jí))SignalSilence® γ-Canin siRNA II (Mouse Specific)(R)-哌-2-羧酸 醋酸鉛三水(>99%,BC)MDR1/ABCB1 (D3H1Q) Rabbit mAb2-溴-氨基-6-甲基吡啶 派洛寧Y(Ind Grade)AFAP1L2/XB130 (D1B5) Rabbit mAb雙酚酸 對(duì)羥基甲酸鈉(>99%,BR)Phospho-MCM3 (Ser112) (D3S4M) Rabbit mAb2-(2-吡啶酮-1-基)-1,1,3,四甲基脲四氟酸鹽 魚(yú)精蛋白硫酸鹽來(lái)源于鮭魚(yú) VEGF Receptor 2 (D5B1) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)羥基-三氟 5-溴-氯-吲哚基酸鹽鈉鹽(分子生物學(xué)級(jí))His-Tag (D3I1O) XP® Rabbit mAb (HRP Conjuga)甲基-酮基-N-基戊酰 乙酸銅水合物(>99%,BR)xCT/SLC7A11 (D2M7A) Rabbit mAb甲基-5- 酸肌酸鈉鹽四水SignalStain® Apoptosis (Cleaved Caspase-3) IHC Dection Kit3,5-二氟-基酚 3,3'-二氨基聯(lián)四鹽酸二水(>99%,BR)Phospho-Akt (Ser473) (D9W9U) Mouse mAb3,5-二氟乙酮 1,6-二酸果糖三鈉鹽(98-101.0%,BR)Phospho-Tyrosine (P-Tyr-1000) MultiMab™ Rabbit mAb mix (HRP Conjuga)2-甲基戊 1,6-二酸果糖三鈉鹽(98-101.0%,BR)β-Arrestin 1 (D8O3J) Rabbit mAb對(duì)乙基酚 銨(>99%,BR)His-Tag (D3I1O) XP® Rabbit mAb2-(甲基氨基)乙基氨酸叔丁酯 四甲基對(duì)鹽(>99%,BR)His-Tag (D3I1O) XP® Rabbit mAb1-Boc-吡咯烷甲酸甲酯 1,3,5-三羥基二水合物(>98%,BR)XPC Antibody4,二氟環(huán)己甲酸 碳酸無(wú)水(>98%,BR)XPC AntibodyFmoc-L-谷氨酸-α-芐酯 ?;撬?>98.5%,JP )Prosta Specific Membrane Antigen (D4S1F) Rabbit mAb氨基-6-氯-1,二磺酰 草酸銨(98~101%,BR)IL-1β (D3U3E) Rabbit mAb正戊(烷)基酸 雙歧桿菌屬通用探針?lè)晒釶CR檢測(cè)試劑盒山羊白介素6(IL-6)ELISA試劑盒phospho-ERK1/MAPK-1/2(Thr183/185) 酸化絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體100 ul 山羊白介素4(IL-4)ELISA試劑盒phospho-ERK1(Thr202/Tyr204) 酸化絲裂原活化蛋白激酶1抗體100 ul 山羊白介素2受體(IL-2R)ELISA試劑盒ERK1/2(p44/42 MAPK) 絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體100 ul 山羊白介素2(IL-2)ELISA試劑盒phospho-p44/42 MAPK (Thr202/Tyr204) 酸化絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體100 ul 山羊白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒phospho-ERK1(Thr202/Thr204)+ERK2(Thr183/Tyr185) 酸化絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體100 ul 山羊白介素1α(IL-1α)ELISA試劑盒phospho-ERK1(Thr197/Thr202) 酸化絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體100 ul 山羊白介素18(IL-18)ELISA試劑盒Eph receptor B2/Ephb2 Ephb2抗體1 Kit 山羊白介素12(IL-12/P40)ELISA試劑盒ERK1/MAPK3 絲裂原活化蛋白激酶3抗體100 ul 山羊白介素10(IL-10)ELISA試劑盒MAPK4 絲裂原活化蛋白激酶4抗體100 ul PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線(xiàn) 在Real- qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線(xiàn),即為擴(kuò)增曲線(xiàn)。熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)一般分為基線(xiàn)期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線(xiàn)期。 PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線(xiàn)性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。 |