熒光染料的優點: 產品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途! 產品名稱 | 卡氏肺孢子蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Pneumocystis carinii | 貨號 | YSP97083 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發出熒光。檢測到的熒光分子數與PCR產物的數量成正比,因此,根據PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態性以及根據SNP區別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環,收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化。而在平臺期,擴增產物已不再呈指數級的增加,PCR 的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據終的 PCR 產物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數。只有在熒光信號指數擴增階段, PCR產物量的對數值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 胸腺嘧啶核苷酸化酶(TP)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ≥99% 綠針假單胞菌 1g 亮氨酸豐富α2-糖蛋白1(LRG1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ≥99% 黃多孔菌 250mg 二氫嘧啶脫氫酶(DPYD)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ≥99% 糞腸球菌 50MG 解聚蛋白(DSTN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 阿孫鏈霉菌 1g 谷胱甘肽S轉移酶ω1(GSTω1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 同絲毛殼 5g 血小板反應蛋白解整合素金屬肽酶5(ADAMTS5)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 食品檢測用鼠傷寒沙門氏菌 1g 組織蛋白酶Z(CTSZ)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 解淀粉芽孢桿菌解淀粉亞種 25g 真核翻譯起始因子6(EIF6)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 大麗輪枝孢 5g 核糖核酸酶Ⅲ(RNASEN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 96% 枯草芽孢桿菌 1g 酰膽堿酯酶關聯蛋白(ACHAP)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 96% 雞白痢沙門氏菌 5g 活性依賴性神經保護因子(ADNP)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ≥98% 放射桿狀根瘤菌 1g 腦富含膜附著信號蛋白1(BASP1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ≥98% 壺黑蛋巢布諾德變型 250mg 小泛素相關修飾蛋白2(SUMO2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ≥98% 香菇 5g Adropin蛋白(AD)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 谷氨酸棒桿菌 1g 蛋白酶激活受體4(PAR4)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 釀酒酵母 5g 聚集蛋白聚糖(AGC)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 黃曲霉 1g 成纖維細胞生長因子受體樣蛋白1(FGFRL1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 棲土曲霉 5g 整合素α5(ITGα5)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 99% Lactococcus 1g 卡氏肺孢子蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒CD8抗體MMP-14(Matrix metalloproinase-14) 金屬基質蛋白酶-14100 ul 酸化原癌蛋白CBL2抗體GFRAlpha-1(GDNF family receptor alpha-1) GDNF家族受體α-1(抗原)100 ul 酸化原癌蛋白CBL2抗體Ang- II (Angionsin II ) 血管緊張素II抗原1Kit 酸化周期素依賴激酶2抗體GLUT2(Glucose transporr type 2) 葡萄糖轉運蛋白2(抗原)100 ul 酸化周期素依賴激酶2抗體ANP(atrial natriuretic peptide) 心鈉肽(心鈉素)抗原20 ul 細胞分裂周期蛋白25抗體GFRA4 ( Persephin receptor ) (GFR receptor alpha 4) GDNF家族受體α-4(抗原)100µl 酸化細胞分裂周期蛋白25抗體GHRF (GHRH) 生長激素釋放激素(因子)(抗原)100 ul 酸化細胞分裂周期蛋白25抗體ANGPTL1/ANG-1 (Angiopoietin-like Proin 1) 血管位蛋白樣1/血管生成素樣蛋白-1抗原100 ul 酸化細胞分裂周期蛋白25抗體GLUT4(Glucose transporr type 4) 葡萄糖轉運蛋白4(抗原)20 ul PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數形式增加的,隨著反應循環數的增加,終PCR反應不再以指數形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產物已不再呈指數級的增加,PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據終的PCR產物量不能計算出初始模板量。 |