PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數形式增加的,隨著反應循環數的增加,終PCR反應不再以指數形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產物已不再呈指數級的增加,PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據終的PCR產物量不能計算出初始模板量。 熒光染料的優點: 產品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 產品名稱 | 滑液支原體探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Mycoplasma synoviae | 貨號 | YSP96988 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發出熒光。檢測到的熒光分子數與PCR產物的數量成正比,因此,根據PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態性以及根據SNP區別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環,收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化。而在平臺期,擴增產物已不再呈指數級的增加,PCR 的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據終的 PCR 產物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數。只有在熒光信號指數擴增階段, PCR產物量的對數值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途! ATP2c1 英文名稱: 鈣離子ATP酶通道蛋白抗體 0.2ml Anti-TNF-alpha 壞死因子-α抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml GATA4 ELISA Kit muman 人GATA結合蛋白4 ELISA試劑盒Multi-class antibodies規格: 96T Anti-STAT1 信號轉導與轉錄激活因子1抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml Rhesus antibody Rh Goat Anti-human IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標記的羊抗人IgG 規格 0.1ml iNOS(Mouse inducible nitric oxide synthase) ELISA Kit 小鼠誘導型一氧化氮合成酶 96T NDUFS3 英文名稱: 線粒體復合物NDUFS3蛋白抗體 0.2ml C15orf52 英文名稱: 15號染色體開放閱讀框52抗體 0.2ml Anti-IL-2 白細胞介素-2單克隆抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml bFGF(Human basic fibroblast growth factor) ELISA Kit 人堿性成纖維細胞生長因子Multi-class antibodies規格: 48T Dicaffeoylquinic acid32451-88-020mgHPLC≥98% 異牡荊苷;異牡荊素;皂草素,皂草黃素,石堿草素,異牡荊黃素Isovitexin29702-25-820mgHPLC≥98% 異歐前胡素;白芷甲素?、異歐芹屬素乙Isoimperatorin482-45-120mgHPLC≥98% 異嗪皮啶;異秦皮啶Isofraxidin486-21-520mgHPLC≥98% 異去氫鉤藤堿;異柯諾辛因堿Isocorynoxeine51014-29-020mgHPLC≥98% 大鼠抑制素結合蛋白(INHBP)ELISA試劑盒 進口/原裝 英文名稱: Rat Inhibin binding protein,INHBP ELISA Kit 大鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA試劑盒 進口/原裝 英文名稱: Rat Helicobacter pylori IgG,Hp-IgG ELISA Kit 大鼠游離β絨毛膜促性腺激素(f-βCG)ELISA試劑盒 進口/原裝 英文名稱: Rat free chorionic gonadotropin,f-βCG ELISA Kit 大鼠游離睪酮(F-TESTO)ELISA試劑盒 進口/原裝 英文名稱: Rat Free Testoterone,F-TESTO ELISA Kit 大鼠游離甲狀腺素(FT4)ELISA試劑盒 進口/原裝 英文名稱: Rat Free ?Anti-G-CSFR 粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子3受體抗體Multi-class antibodies規格: 0.2ml Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Guinea pig IgG/HRP 辣根過氧化物酶標記的小鼠抗豚鼠IgG 規格 0.1ml ANG-2(Human Angiopoietin 2) ELISA Kit 人血管生成素2 96T phospho-c-Raf(Ser296) 英文名稱: 酸化原癌基因c-Raf抗體 0.1ml 細胞角蛋白 18 單克隆抗體Cytokeratin 18 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 細胞角蛋白 18 單克隆抗體Cytokeratin 18 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 組蛋白H3 (Mono Methyl Lys79) 單克隆抗體(1C2)Histone H3 (Mono Methyl Lys79) Monoclonal Antibody(1C2)700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 組蛋白H3 (Mono Methyl Lys79) 單克隆抗體(1E10)Histone H3 (Mono Methyl Lys79) Monoclonal Antibody(1E10)700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 組蛋白H3 (Tri Methyl Lys9) 單克隆抗體(2C3)Histone H3 (Tri Methyl Lys9) Monoclonal Antibody(2C3)700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 組蛋白H3 (Di Methyl Lys27) 單克隆抗體(3B12)Histone H3 (Di Methyl Lys27) Monoclonal Antibody(3B12)700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 滑液支原體探針法熒光PCR檢測試劑盒Ⅱ型膠原α1蛋白/軟骨鈣素抗體RARRES1/TIG1/FITC 熒光素標記視黃酸受體應答蛋白1抗體IgG100 ul 皮質素1抗體TIGAR humen/FITC 熒光素標記兔抗TIGAR蛋白抗體IgG100 ul 8號染色體開放閱讀框70抗體Rarres2/TIG2/FITC 熒光素標記視黃酸受體應答蛋白2抗體IgG100 ul 胰羧肽酶E抗體Rarres3/TIG3/Chemerin/FITC 熒光素標記視黃酸受體應答蛋白3抗體IgG20 ul 酸化細胞角蛋白18抗體rInsulin /HRP 辣根過氧化物酶標記抗重組胰島素抗體IgG100 ug 20號染色體開放閱讀框112抗體rInsulin /FITC 熒光素標記抗重組胰島素抗體IgG100 ul 10號染色體開放閱讀框88抗體rInsulin human monoclonal/FITC 熒光素標記重組胰島素單克隆抗體IgG100 ul 富含半胱氨酸C端蛋白1抗體rInsulin monoclonal (pig)/FITC 熒光素標記抗胰島素單克隆抗體(豬)IgG200 ul E1A激活基因刺激蛋白2抗體TIMP-1/FITC 熒光素標記金屬蛋白酶組織抑制因子-1抗體IgG100 ul |