微生物菌種的培養：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養基，培養基中含有一些適合產孢子的營養成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養環境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養可直接或間接誘導孢子形成。面的培養溫度大多數為28 ℃，少數為37 ℃，培養時間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農產品為培養基。這是由于這些農產品中的營養成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養一般為25～28 ℃，培養時間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養，有時母瓶種子也可以直接進罐。種子培養基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養成分不宜過濃，子瓶培養基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養基配方。

產品名稱：尖鐮孢萎蔫專化型 斜面
貨號：YS-01J13282
拉丁文: Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum

提供形式: 試管斜面

安全等級: 1

模式菌株: no

應用領域: 棉花枯萎病菌

培養基: 綜合PDA：馬鈴薯煮汁1000mL，硫酸鎂 1.5g，葡萄糖 20g，維生素B1 10mg，瓊脂 20g，pH自然。馬鈴薯煮液：200g馬鈴薯，去皮，切塊，放入蒸餾水中煮沸30min，取濾液定容至1000mL，備用。

生長條件: 24-28℃，好氧

存儲條件: 4℃，避光冷藏

公司產品僅用于科研培養及打管說明：

1、安瓿瓶開封：用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復培養：用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養基，滴入安瓿管內，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養基試管中，并在建議的條件下培養。

3、注意事項：菌種活化前，請將安瓿管保存在6-10℃的環境下，某些菌種經過冷凍干燥保存后，延遲期較長，需要連續兩次繼代培養才能正常生長

4、復蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復蘇后需保藏的斜面應于4℃中保藏。

保存方法：

傳代保存法：培養基的濃度不宜過高，營養成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應在可能的范圍內盡量降低。培養溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產酸菌種，則應在培養基中添加少量碳酸鈣 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數年。本法應注意避免水分的蒸發。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內，再放入低溫冰箱內進行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內，再置于冰箱內進行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

微生物培養方法：

1、平板劃線分離法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環圈在平板培養基表面，通過分區劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞，經培養后生長繁殖成單菌落。

2、稀釋涂布平板法將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養基的表面進行培養，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養基表面形成單個菌落。

上述兩種方法雖然都可以實現觀察菌落特征的目的，但平板劃線分離法不能對菌落計數，而稀釋涂布平板法培養過程復雜，對平板的要求比較高，可參照以下步驟：

a、制備平板培養基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養基加熱溶化并冷卻至65℃，向氯化鈉蔗糖瓊脂培養基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均勻，然后取20ml混合均勻的培養基溶液倒入培養皿，輕輕搖動培養皿，使培養基溶液均勻分布在培養皿底部，待培養基溶液凝固后即得平板培養基。

b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g，放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖15～20min混合均勻，用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻，制成活性污泥混合液。

c、培養基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培養基表面的中央位置，用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴展，使之分布均勻。

DEK  DEK癌基因結合蛋白胰十二指腸同源異型盒基因抗原

DEGS1  退行性精母同源物1抗體果膠酶抗原

Defensin β2/DEFB2/HBD-2  防御素β2抗體肝癌高表達基因抗原

Defensin β2  防御素β2抗體腦啡肽

Defensin β1  防御素β1抗體腸道肽轉運蛋白2/小肽轉運蛋白2抗原

Defensin β1  防御素β1抗體蛋白激酶R樣內質網激酶抗原

Defensin alpha 4  防御素α4抗體纖維束蛋白同源物1/肌動蛋白集束蛋白/圓線蟲紫癜 抗原

DEF1/α Defensin 1/3  防御素α1/3抗體胃蛋白酶原C蛋白抗原

DEDD2  死亡效應結構域蛋白2抗體過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1α抗原

DEDD1  死亡效應結構域蛋白1抗體顆粒蛋白前體抗原

DECTIN-1/CLECSF12/beta Glucan Receptor  β葡聚糖受體抗體抑制素/腫瘤抑制因子抗原

DECTIN 2  C型凝集素結構域家族6成員A抗體蛋白激酶A(多肽)

DECR1  線粒體2,4-雙烯酰輔酶A還原酶1抗體尿激酶型纖溶酶原激活因子（多肽）

DEC-205/CD205/Ly75  淋巴抗原75抗體平足蛋白抗原

DEAF1/Deformed Epidermal Autoregulatory Factor 1  畸形表皮自調節因子1抗體多囊腎蛋白1抗原
尖鐮孢萎蔫專化型 斜面菌種傳代膠凍樣類芽孢桿菌磷酸化雷帕霉素靶蛋白抗體 2'-O-(tert-Butyldimethylsilyl)paclitaxel 質量規格：IND

梨生囊殼孢NADH復合體6抗體 3'-p-Hydroxy Paclitaxel 質量規格：高純級,98%

擬可可毛球二孢黑色素瘤相關抗原11抗體 Paclitaxel-d5 質量規格：AR

黑曲霉同源盒基因Msx2抗體 7-epi-Taxol 質量規格：BS(生物染色級)

灰綠犁頭霉磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶MARK4抗體 Paclitaxel C 質量規格：分析標準品

香菇膜型基質金屬蛋白酶胞質尾結合蛋白1抗體 2'-O-(tert-Butyldimethylsilyl)-6α-hydroxy-7-epi-paclitaxel 質量規格：酸堿指示劑

圍小叢殼周期調節蛋白P95抗體 N-Debenzoyl-7-paclitaxel 質量規格：CP

蘋果盤二孢自噬微管相關蛋白輕鏈β3抗體 6α,3'-p-Dihydroxy Paclitaxel 質量規格：0.98