客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。 產(chǎn)品名稱 | 石膏樣小孢子菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Microsporum gypseum | 貨號 | YSP96918 |
熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實用新型技術(shù)公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
phospho-APC (Ser2054) 英文名稱： 酸化腺瘤樣息肉抗體 0.1ml 抗K3蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml Human Fibrinogen like peptide 2,fgl2 ELISA Kit 人纖維介素蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T Anti-Snake poison Protein 蛇毒蛋白抗體(中華眼鏡蛇)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml Rhesus antibody Rh Goat Anti-Mouse IgM/Cy3 Cy3標(biāo)記的羊抗小鼠IgM 規(guī)格 0.1ml AFP-L3(Human alpha-fetoprotein Lens culinaris agglutiin 3) ELISA Kit 人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3 96T NECAB1 英文名稱： 神經(jīng)元鈣結(jié)合相關(guān)蛋白EFCBP1抗體 0.2ml BRCA1 英文名稱： 癌易感基因1抗體 0.1ml Anti-Rho C RhoC抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml ENA-Ab(Human anti-extractable nuclear antigen antibody) ELISA Kit 人抗可提取核抗原抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T Anti-IL-1 Alpha 白介素1α抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml Rhesus antibody Rh Lrp2/Megalin 糖蛋白gp330抗體 規(guī)格 0.2ml 17-KS(Human 17-ketosteroids) ELISA Kit 人17-酮類固醇 96T phospho-c-Raf(Tyr341) 英文名稱： 酸化原癌基因c-Raf抗體 0.1ml EVA肉湯250克EVA Broth用于鏈球菌的增菌培養(yǎng) 賴氨酸吲哚動力培養(yǎng)基250克LIM Medium用于鏈球菌的分離培養(yǎng)；細(xì)菌的賴氨酸、吲哚和動力復(fù)合生化試驗 BETA-SSA瓊脂250克BETA-SSA Agar鏈球菌的選擇性分離培養(yǎng) 胰酪胨大豆羊血瓊脂基礎(chǔ)250克Trypticase Soy Sheep Blood Agar Base蠟樣芽孢桿菌的溶血測試驗 改良V-P培養(yǎng)基250克V-P Medium Modified蠟樣芽孢桿菌的溶血試驗 R2A瓊脂250克R-2A Agar飲用水中導(dǎo)生細(xì)菌分離培養(yǎng)
石膏樣小孢子菌探針法熒光PCR檢測試劑盒血小板活化因子CTR9抗體OAT-1/FITC 熒光素標(biāo)記陰離子轉(zhuǎn)運蛋白-1(抗)抗體IgG100 ul 前列環(huán)素合成酶抗體OAT-1/FITC 熒光素標(biāo)記陰離子轉(zhuǎn)運蛋白-1（抗大、）抗體IgG100 ul 軟骨寡聚基質(zhì)蛋白抗體OAT-3/FITC 熒光素標(biāo)記陰離子轉(zhuǎn)運蛋白-3抗體IgG100 ul T淋巴細(xì)胞CD1A抗體OAT4L/URAT1 /FITC 熒光素標(biāo)記尿酸鹽重吸收轉(zhuǎn)運子1抗體IgG100 ul 酸化周期素B1抗體obestatin/Ghrelin/GHRP /FITC 熒光素標(biāo)記肥胖抑制素抗體IgG500 ul 胞漿型脂酶A2抗體OCLN(Occluding)/FITC 熒光素標(biāo)記咬合蛋白抗體IgG100 ul 膽固酯轉(zhuǎn)移蛋白抗體ODC/FITC 熒光素標(biāo)記抗鳥氨酸脫羧酶抗體IgG100 ul 緊密連接蛋白6抗體OCT1 /FITC 熒光素標(biāo)記陽離子轉(zhuǎn)運器1抗體IgG20 ul 酸化緊密連接蛋白6抗體OCT2 /FITC 熒光素標(biāo)記陽離子轉(zhuǎn)運蛋白2抗體IgG100 ul
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 |
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