PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。

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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測(cè)，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
癌抗雌激素藥物耐藥性基因1(BCAR1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%　根瘤菌　25g

肌微管素相關(guān)蛋白9(MTMR9)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%　松生擬層孔菌　5g

皮膚橋蛋白(DPT)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　99%　Stenotrophomonas rhizophila　25g

雙腎上腺皮質(zhì)激素(DCX)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　99%　玫瑰考克氏菌　5g

組氨酸豐富糖蛋白(HRG)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　菜豆根瘤菌　1g

含MOCO硫化酶羧基端域蛋白1(MOSC1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　巨孢鏈霉菌　5g

含MANSC域蛋白1(MANSC1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　98%　短柄帚霉　5g

利鈉肽受體2(NPR2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　99%　玉米大斑病菌　100g

碳酸酐酶Ⅳ(CA4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　99%　糞腸球菌　25g

對(duì)氧酶3(PON3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　99%　屎腸球菌　5g

血管非炎性蛋白3(VNN3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%　檸條根瘤菌　1g

脂素1(LPIN1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%　畢赤酵母　25g

羧肽酶B1(CPB1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　97%　Escherichia　5g

組蛋白脫酰基酶6(HDAC6)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　豐度：10atom%；化學(xué)純度：≥98.5%　浸麻類芽孢桿菌　1g

Bcl2關(guān)聯(lián)永生基因3(BAG3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　豐度：10atom%；化學(xué)純度：≥98.5%　解淀粉芽孢桿菌　25g

胰島素降解酶(IDE)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　豐度：10atom%；化學(xué)純度：≥98.5%　腐皮鐮孢　5g

ⅩⅤ型膠原(COL15)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　95%　微枝形桿菌　1g

絲織蛋白1(DBN1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)　≥97%　釀酒酵母　1g
瘧原蟲通用探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒周期素A2抗體Cytomegalovirus (CMV)PP65  細(xì)胞巨化病毒(多肽)100 ul

鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體DDC (DOPA decarboxylase)  多巴脫羧酶（抗原）100 ul

鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2b/2γ抗體EGFR- V III  表皮生長因子受體-8（多肽片斷抗原）100 ul

細(xì)胞凋亡敏感性基因抗體Alpha-AF/ Alpha-Afa(alpha-L-arabinofuranosidase)  α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗原100 ul

天冬氨酸-胱氨酸特異性蛋白酶家族抗體Endothelin-1  內(nèi)皮素-1(多肽抗原)100 ul

半胱酸蛋白酶-10抗體Endothelin-1 (ET-1)  內(nèi)皮素-1（抗原）100 ul

半胱酸蛋白酶蛋白-12抗體ERAB   內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Aβ相關(guān)結(jié)合蛋白（抗原）100µl

半胱酸蛋白酶蛋白-13抗體ER-Alpha peptide  雌激素受體（多肽抗原）100 ul

CD10抗體TIMP-1(Tissue Inhibitor of Metalloproinase-1)  金屬蛋白酶組織抑制因子-1（抗原）1Kit