樣品RNA的抽提: ①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。 產品名稱 | 鸚鵡熱衣原體探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Chlamydia psittaci | 貨號 | YSP96538 |
實驗過程: 一、試劑準備 1. DNA模板 2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。 3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術: 本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環形凸起,兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析,提供實驗報告給您。 正庚烷(無水級,99%)CD3 (17A2) Rat mAb (APC Conjuga)噻唑 三十六烷(standard for GC,≥98.0%(GC))PHB1 Antibody基肼鹽酸鹽 三十六烷(分析標準品,≥99.0%(GC))PHB1 Antibody4,5,6,7-四氫噻吩[3,2-c]吡啶鹽酸鹽 alpha-六六六標準溶液(100μg/ml,u=3%)EML4 Antibody2-甲基基 alpha-六六六標準溶液(10μg/ml,u=6%)Met (D1C2) XP® Rabbit mAb (HRP Conjuga)雙酮酰 alpha-六六六標準溶液(50μg/mL,分析標準品)Thioredoxin 1 (C63C6) Rabbit mAb溴吲哚-2-甲酸 正十六烷(Standard for GC,>99.5%(GC))NeuN (D4G4O) XP® Rabbit mAbN-叔丁基-5-溴-2-噻吩磺酰 正十六烷(分析標準品,≥99.5%(GC))NeuN (D4G4O) XP® Rabbit mAb基肼鹽酸鹽 正己(Standard for GC,>99.5%(GC))PPARγ (D69) Antibody1,2-環氧環戊 正己(分析標準品,>99.8%(GC))Phospho-Shc (Tyr317) Antibody1H-并咪唑-2-甲酸 十六(分析標準品,≥99.5%(GC))CD16 (D1N9L) Rabbit mAbDL-alpha-甘氨酸 正庚酸(Standard for GC)Shc Antibody溴乙 正庚酸(標準品)Calnexin Antibody2-甲基-3,5-二甲酸 1,6-己二(standard for GC)Phospho-Shc (Tyr239/240) Antibody2-溴-6-羥基吡啶 2-庚酮(分析標準品,≥99.8%(GC))Phospho-Shc (Tyr239/240) Antibody6-氟吲哚-甲 十七烷(分析標準品,≥99.5%(GC))PPARγ (C26H12) Rabbit mAb氨基-2-氯-硝基吡啶 三十一烷(Standard for GC≥97.0%(GC))PPARγ (C26H12) Rabbit mAb甲氧基 二十六烷(分析標準品, ≥99.5% (GC))SCD1 (M38) Antibody叔丁基-吡唑-5- 鸚鵡熱衣原體探針法熒光PCR檢測試劑盒HIV(1+2)抗原抗體ELISA試劑盒phospho-CSF1R(Tyr923) 酸化巨噬細胞集落刺激因子受體抗體20 ul H5型病毒(H5N1)抗體(IgG)ELISA試劑盒MCT1 單羧酸轉運蛋白-1抗體1000 ul G蛋白偶聯受體152(GPR152/PGR5)ELISA試劑盒MCM2 微小染色體維持缺陷蛋白2抗體200 ul G蛋白偶聯受體109A(GPR109A)ELISA試劑盒MCM3 微小染色體維持缺陷蛋白3抗體100 ul G蛋白偶聯膽汁酸受體1(GPBAR1)ELISA試劑盒MCM5 微小染色體維持缺陷蛋白5抗體100 ul G蛋白偶聯雌激素受體1(GPR30)ELISA試劑盒MCM7 微小染色體維持缺陷蛋白7抗體100 ul G蛋白偶合受體44(GPR44/CRTH2/DL1R)ELISA試劑盒MCSF 巨噬細胞克隆刺激因子抗體100 ul GTP酶NRas(NRAS)ELISA試劑盒Mcl1 髓樣細胞白血病-1抗體100 ul Gremlin-1蛋白(GREM1)ELISA試劑盒Phospho-Mcl1 (Ser159/Thr163) 酸化髓樣細胞白血病-1抗體20 ul |