特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 諾氏瘧原蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Plasmodium knowlesi | 貨號 | YSP97076 |
熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 精氨酸酶(Arg)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 釀酒酵母 1g 含RNA結(jié)合冷休克域蛋白E1(CSDE1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 鮑魚側(cè)耳 100g C-型凝集素域家族11成員A(CLEC11A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 竹針孢座囊菌 25g 絲氨酸蛋白酶23(PRSS23)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 梨多細菌源菌 5g 巢蛋白2(NID2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 嗜鹽動性球菌 1g 巢蛋白2(NID2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥99% 密歇根克雷伯氏菌 5MG FlightlessⅠ同源物(FLIⅠ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥98% 平田頭菇 5g Thy1細胞表面抗原(Thy1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 硒砷芽孢桿菌 25ml 吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 裴氏著色霉 5ml 沉默調(diào)節(jié)蛋白1(SIRT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 釀酒酵母 100g 肥大細胞類糜蛋白酶1(CMA1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 瑞山海源菌 25g 促泌素(SCGN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 圍小叢殼扁圓變種 1g 多巴脫羧酶(DDC)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 栗疫菌 5g 干擾素α4(IFNα4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 新城疫病毒 1g 熱休克蛋白β8(HSPβ8)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 尖鐮孢古巴專化型 5g 運動神經(jīng)元生存蛋白2(SMN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 玫瑰色紅球菌 1g γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)氨酶5(γGT5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 運動節(jié)桿菌 25g 谷氧還蛋白(GLRX)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% Rhizobium multihospitium 5g 諾氏瘧原蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒細胞色素b245輕鏈抗體AD7C-NTP/NTP/AF peptide 神經(jīng)絲蛋白蛋白多肽抗原()300 ul 5號染色體開放閱讀框44抗體Caspase-10 半胱酸蛋白酶-10(抗原)1 Kit 心臟特異性絲氨酸蛋白酶抗體Caspase-13 半胱酸蛋白酶蛋白-13(抗原)300 ul 胞漿型脂酶A2抗體CD19(B-lymphocy gen CD19 precursor) CD19(抗原)100µg 細胞周期及凋亡調(diào)節(jié)蛋白1抗體DRADA/ADAR1(Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase)N rminal 雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗原(N端)100 ul 神經(jīng)細胞粘附分子1抗體DRADA/ADAR1(Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase) 雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗原300 ul 緊密連接蛋白5抗體AEG-1 peptide AEG-1抗原100 ul 富含半胱氨酸運動神經(jīng)元蛋白1抗體CD31 (PECAM-1) 血小板內(nèi)皮細胞黏附分子-1(抗原)300 ul 細胞角蛋白5+6抗體ADFP/ADRP/adipophilin 脂肪組織分化相關(guān)蛋白抗原500 ul |