樣品RNA的抽提: ①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。 產品名稱 | 前病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | HIV-1 Provirus HIV-1 | 貨號 | YSP96817 |
實驗過程: 一、試劑準備 1. DNA模板 2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。 3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術: 本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環形凸起,兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析,提供實驗報告給您。 多多(S)-(+)-甘油縮酮 聚3,5-二甲基-羥基甲 聚酸酯5-溴-2-吡啶 聚縮丁5-硝基-2,二吡啶 甲酸(>98%,BR)鄰 鉑酸(>40%(Pt),BC)間氨基甲 甲酸(>98%,BC)氨基縮二甲 氫(>98%,BC)N-氧羰基鄰二甲酰亞 偏重亞硫酸(>95%,BC)(三氟甲基)甲酰 基黃原酸(>95%,BC)2-溴-6-氟甲酸 油酸(>96%,BR)三氟甲氧基溴 酸氫二三水(分子生物學級)2--5-甲氧基嘧啶 酸三三水(>98%,BC)異硫酸異酯 焦硫酸(>98%,BR)三基氫化鋰 硅酸(>98%,BR)1,二氟-5- 硬脂酸(>98%,BR)仲丁鋁 亞硫酸(>95%,BR)5-甲基水楊酸甲酯 一水(>98%,BR)二氫雙(2-甲氧氧基)鋁酸鈉 前病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒Bcl-2抗體GR /FITC 熒光素標記糖皮質激素受體抗體IgG1 mg 腦轉錄因子4蛋白抗體GPNMB/Osoactivin/FITC 熒光素標記GPNMB抗體IgG200 ul 膽鹽激活脂肪酶抗體Phospho-Glucocorticoid Receptor (Ser211) /FITC 熒光素標記兔抗、大、糖皮質激素受體抗體IgG50 ul 3-羥丁酸脫氫酶抗體GRB2/ASH /FITC 熒光素標記生長因子受體結合蛋白2抗體IgG100 ul 長鏈脂肪酸酰基輔酶A水解酶抗體GPR109A/HM74A/FITC 熒光素標記G蛋白偶聯受體109A抗體IgG100 ml 酸化癌易感基因1抗體GRB10/FITC 熒光素標記兔抗、大、生長因子受體結合蛋白10抗體IgG100 ul 酸化β分泌酶抗體Phospho-GRB10 (Tyr67) /FITC 熒光素標記兔抗、大、生長因子受體結合蛋白10抗體IgG400 ul 酸化相關死亡促進因子抗體GrB(Granzyme B)(AA 18-29)/FITC 熒光素標記顆粒酶B抗體IgG400 ul 酸化相關死亡促進因子抗體gremlin/FITC 熒光素標記骨形態形成蛋白拮抗蛋白抗體IgG100 ul |