熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分，并將兩個(gè)部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測(cè)的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測(cè)基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測(cè)
1）紫外吸收法測(cè)定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測(cè)定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
鄰二甲(>99.0%(GC))Phospho-VASP (Ser157) Antibody四丁基高

2-氨基吡啶(>99.0%(GC)(T))Phospho-RIP (Ser166) Antibody (Rodent Specific)洛匹那韋

2-氨基硫酚(>95.0%(T))VASP Antibody2,5-二氟酸

丹磺酰肼(>95.0%(HPLC)(T))HNF4α (C11F12) Rabbit mAb硝酸四甲基銨

DBD-H [=(N,N-二甲氨基磺酰)-7-肼基-2,1,并惡二唑(>98.0%(HPLC))Phospho-VASP (Ser239) Antibody2-二吡啶基酮

NBD-H (=肼基-7-硝基-2,1,并惡二唑肼)(>98.0%(HPLC))Phospho-VASP (Ser239) Antibody2-羥基-丁酸酮

1,環(huán)己二酮(>98.0%(GC)(T))IFN-α (8C21) Mouse mAb2-乙炔基吡啶

ABD-F[=(氨磺酰)-7-氟-2,1,并惡二唑](>98.0%(N)(T))SimpleChIP® Human ERRFI1 Upstream PrimersN-芐氧羰基--6-氨基己酸

二茂鐵乙酸(>97.0%(GC))IL-1β (D6D6T) Rabbit mAb (Mouse Specific)1-氯異喹啉

(肼基羰基)二茂鐵(>95.0%(HPLC)(T),用于高效液相色譜標(biāo)記)Phospho-Met (Tyr1349) AntibodyN-甲基-硝基芐

(2R)-6-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基)-2,5,7,8-四并二氫吡喃-2-羧酸琥珀酰亞酯Smad2 (86F7) Rabbit mAbN-甲基-硝基芐

二茂鐵甲酸 N-琥珀酰亞酯(>98.0%(HPLC))Phospho-PDGF Receptor β (Tyr1009) (42F9) Rabbit mAb醋酸錳

1-丁(>99.0%(GC))Phospho-PDGF Receptor β (Tyr1009) (42F9) Rabbit mAb氯-甲基吡啶鹽酸鹽

環(huán)己烷(>99.5%(GC))Phospho-Rpb1 CTD (Ser2) (E1Z3G) Rabbit mAb (Biotinylad)L-基甘氨酸

己烷(>96.0%(GC))Phospho-Met (Tyr1234/1235) Antibody6-羥基吡啶-2-羧酸

2,2,*基戊烷(>99.0%(GC))Phospho-Met (Tyr1234/1235) Antibodytrans-甲氧基肉桂

異(>99.5%(GC))ALK (D5F3®) XP® Rabbit mAb (HRP Conjuga)2,二氯-5-甲氧基嘧啶

甲基環(huán)己烷(>99.0%(GC))Met (25H2) Mouse mAb1,2,6,7-四氫-8H-茚并[5,b]呋喃-8-酮
牛腎盂腎炎棒桿菌探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒雞甘油-3-酸脫氫酶(GAPDH)ELISA試劑盒Phospho-PEA15 (Ser116)  酸化星形膠質(zhì)細(xì)胞PEA15抗體100 ul

雞甘肽(GAL)ELISA試劑盒PEDF  色素上皮源性因子抗體100 ul

雞鈣結(jié)合蛋白(CALB2)ELISA試劑盒PEG10  肝癌高表達(dá)基因抗體100 ul

雞分泌型免疫球蛋白A(SIgA)ELISA試劑盒PEG3  PEG3蛋白抗體100 ul

雞肺炎支原體(MP)抗體(IgG)ELISA試劑盒Enkephalin  腦啡肽抗體20 ul

雞多巴(DA)ELISA試劑盒PEPT1  腸道肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1/小肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體100 ul

雞凋亡相關(guān)因子(FAS)ELISA試劑盒PEPT2/SLC15A2  腸道肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體100 ul

雞低密度脂蛋白(LDL)ELISA試劑盒peripherin  外周蛋白抗體1 Kit

雞的牛血清白蛋白(BSA)ELISA試劑盒PERK  蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶抗體1 Kit