樣品RNA的抽提: ①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。 產品名稱 | 羊巴貝斯蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Babesia ovis | 貨號 | YSP96409 |
實驗過程: 一、試劑準備 1. DNA模板 2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。 3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術: 本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環形凸起,兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析,提供實驗報告給您。 氯霉素(標準品)CYP17A1 (E6Y3S) Rabbit mAb3,二甲酸 氯霉素(植物細胞培養級)Cyclin D1 Blocking Peptide右旋鄰氯扁桃酸 阿魏酸鈉Kindlin-3 (D8I7V) Rabbit mAbN-叔丁氧羰基-1,二 阿魏酸鈉(標準品)Phospho-Ezrin (Thr567)/Radixin (Thr564)/ Moesin (Thr558) Blocking Peptide6-甲氧基異喹啉 頭孢妥侖匹酯NEDD8 Blocking Peptide4,6-二氯-5-嘧啶甲 頭孢妥侖匹酯(標準品)Cleaved Caspase-3 (Asp175) Blocking Peptide氨基-6-氯嘧啶 吡酰Pan-AD (D3F7L) Rabbit mAb (Biotinylad)2,二甲基-1,噻唑-5-羧酸 吡酰(標準品)PP2A B Subunit Blocking PeptideGrubbs 2 代催化劑 鹽酸地美環素;去甲基金霉素Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) Blocking Peptide1-(羥基)-甲基哌 鹽酸地美環素;去甲基金霉素(標準品)4E-BP1 Blocking PeptideN-[(*基硅)甲基]芐 甲基帕羅西汀RelB (D7D7W) Rabbit mAb1,1'-二(二環己基膦)-二茂鐵 硫酸頭孢喹諾PP2A A Subunit Blocking Peptide2-異亞乙酮 頭孢噻呋鈉p21 Waf1/Cip1 Blocking Peptide正丁基二(1-金剛烷基)膦 頭孢噻呋鈉(標準品)E-Cadherin Blocking Peptide6-氯煙酸 硫酸鈉Thioredoxin 1 Blocking Peptide2-雙環己基膦-2′,6′-二甲氧基聯 5'-三酸胞苷二鈉鹽(二水)HER2/ErbB2 Blocking Peptide氨基-5-氯 伏格列波糖NF-κB p65 Blocking Peptide氨基-氯甲 伏格列波糖(標準品)Tri-Methyl-Histone H3 (Lys4) Blocking Peptide氨基-2-氟 羊巴貝斯蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒NANOG同源域蛋白(NANOG)ELISA試劑盒COX IV-1 細胞色素c氧化酶IV亞型1抗體100 ul NAD依賴性蛋白脫乙酰酶sirtuin-1(SIRT1)ELISA試劑盒Anti(c-phycocyanin C-藻藍素/藻藍蛋白抗體20 ul NADPH氧化酶1()ELISA試劑盒C Peptide C-肽抗體100 ul M型肌酸激酶(CKM)ELISA試劑盒CPT1A 肉毒棕櫚酰基轉移酶1A抗體5 mg MAP激酶活化蛋白激酶2(MAPKAPK2)ELISA試劑盒CPSF4/CPSF30 剪切和多聚腺苷酸化特異性因子4抗體100 ul L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA試劑盒Calretinin 鈣結合蛋白抗體100 ul L-酸脫氫酶A鏈(LDH-A)ELISA試劑盒Crk p38 /CrkII Crk p38抗體100 ul L氨酸解氨酶(PAL)ELISA試劑盒phospho-Crk p38 (Tyr221) 酸化Crk p38抗體20 ul Klotho ELISA試劑盒SLAMF6 SLAMF6抗體100 ul |