熒光定量PCR試劑盒技術(shù): 產(chǎn)品僅用于科研本實用新型技術(shù)公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設(shè)有限位凸起,下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋,側(cè)蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起,兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿,固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側(cè)蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設(shè)計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實驗報告給您。 產(chǎn)品名稱 | 莢膜組織胞漿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Histoplasma capsulatum | 貨號 | YSP96815 |
樣品RNA的抽提: ①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質(zhì)量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 實驗過程: 一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設(shè)立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。 3.產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 鄰香蘭素(>98%,BR)2-溴酮 草酰肼(>98%,BR)6-溴-2-吡啶羧酸 惡唑(>96%,BC)2-甲基-5-硝基吡啶 酸鈀L-扁桃酸甲酯 化鈀吲哚-羧酸 硝酸鈀右旋樟腦-10-磺酰 鈀粉(>99%,BR)Boc-O-芐基-L-酪氨酸 對氨基甲脒(>98%,BR)L-哌啶甲酸鹽酸鹽 甲氧基(>97%,BR)L-脯氨酸甲酯鹽酸鹽 2-吡啶偶氮間二酚單鈉鹽2--氟 酸副品紅(>85%,BS)3'-溴酮 鈣激活通道阻斷劑來源于覃青霉2'-酮 1,二酰基哌(>97%,BR)2'-溴酮 青霉酸(>98% (HPLC),BC)(1S,2S)-(+)-1,2-環(huán)己二 青霉震顫素(>95%(HPLC),BC)氨基酸頻哪酯 β-D-半糖五酸酯(>98%,BR)2,二羥基甲酸甲酯 酸酮酸單環(huán)己銨鹽(>98%,BC)鄰甲氧基甲酰 人造沸石甲氧基-2-氧代-1,2-二氫-基吡啶 莢膜組織胞漿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒肝病毒NS5A反轉(zhuǎn)錄蛋白8抗體GLUT12/slc2a12/FITC 熒光素標(biāo)記葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白12抗體IgG100 ul 骨形態(tài)發(fā)生蛋白1/膠原C蛋白肽鏈內(nèi)切酶抗體Glycoproin /FITC 熒光素標(biāo)記風(fēng)疹病毒糖蛋白抗體IgG100 ul 骨形態(tài)發(fā)生蛋白9抗體glypican 1/FITC 熒光素標(biāo)記脂酰基醇蛋白聚糖-1抗體IgG20 ul 微管蛋白β輔助因子D抗體Glypican 4/FITC 熒光素標(biāo)記脂酰基醇蛋白聚糖-4抗體IgG400 ul 鈣粘蛋白相關(guān)蛋白受體BTR1抗體GlyR Alpha1/FITC 熒光素標(biāo)記甘氨酸受體alpha1型抗體IgG100 ul 有絲分裂蛋白BUB3抗體MMP24(MT5-MMP)/FITC 熒光素標(biāo)記基質(zhì)金屬蛋白酶-24抗體IgG100 ul p60TRP蛋白抗體GM-CSF/FITC 熒光素標(biāo)記粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞克隆刺激因子抗體IgG100 ul 博萊霉素水解酶抗體GM-CSFR Alpha/FITC 熒光素標(biāo)記粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體α抗體IgG100 ul 短蛋白聚糖抗體GNLY/NKG5/FITC 熒光素標(biāo)記顆粒溶素抗體IgG20 ul |