樣品RNA的抽提: ①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。 產品名稱 | 殺蠣包拉米蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Bonamia exitiosus | 貨號 | YSP96443 |
實驗過程: 一、試劑準備 1. DNA模板 2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。 3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術: 本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環形凸起,兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析,提供實驗報告給您。 2'-脫氧鳥苷-5'-一酸二鈉鹽(分子生物學級)Phospho-Chk2 (Thr68) (C13C1) Rabbit mAb (PE Conjuga)全氟甲基環己烷 10%甲溶液C/EBP Antibody Sampler Kit異丁基硅烷 L-Prosta Specific Membrane Antigen (D7I8E) XP® Rabbit mAb異氧基硅氯 二甲基脲Prosta Specific Membrane Antigen (D7I8E) XP® Rabbit mAb三異基硅烷 氧化鎳SSU72 (D3I2D) Rabbit mAb辛基*氧基硅烷 吩Phospho-CaMKK2 (Ser511) Antibody*氧基(7-辛-1-基)硅烷 檸檬酸三一水Tunicamycin*氧基環氧烷 氯化鍶六水BCAT1 Antibody基*基硅烷 聚環氧乙月桂酰, 20% 溶液POLR3A (D5Y2D) Rabbit mAb乙基*氧硅烷 硫酸鈣二水Vimentin (D21H3) XP® Rabbit mAb (HRP Conjuga)*氧硅烷 2'-脫氧胞苷'-5'-酸(dCMP)Caspase-7 (D2Q3L) Rabbit mAb基三乙氧基硅烷 DSS(分子生物學級)Caspase-7 (D2Q3L) Rabbit mAb基*氧基硅烷 氫氧化鋰一水PathScan® Total FGF Receptor 1 Sandwich ELISA Kit*氧基基硅烷 過硫酸鈉FoxO3a (D19A7) Rabbit mAb基三氯硅烷 腺苷脫氨酶(15U/mg)Cre Recombinase (D3U7F) Rabbit mAb*氧基(2-乙基)硅烷 阿脲TAL1 Antibody2,2,*基丁烷 檸檬酸二銨,檸檬酸氫二銨TPX2 (D9Y1V) Rabbit mAb*基環三氧烷 酸鈣五水(>98%,USP)AHSA1 Antibody2,2,*基正己烷 殺蠣包拉米蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒間變性淋巴瘤激酶(ALK)ELISA試劑盒FABPB 腦型脂肪酸結合蛋白抗體100 ul 間α-胰蛋白酶抑制因子重鏈H1(ITIH1)ELISA試劑盒factor V 凝血因子5抗體10 mg 間-alpha-胰蛋白酶抑制劑重鏈H4(ITIH4/IHRP/ITIHL1/PK120/PRO1851)ELISA試劑盒factor VIII(FVIII) human 第八因子相關抗原抗體100 ul 假定蛋白LOC677168 ELISA試劑盒factor VIII(FVIII) 第八因子相關抗原抗體100 ul 離子通道蛋白抗體ELISA試劑盒factor XIII 凝血因子13抗體100 ul 甲狀腺素抗體ELISA試劑盒FADD Fas死亡結構域相關蛋白100 ul 甲狀腺素抗體(TAb)ELISA試劑盒phospho-FADD(Ser194) 酸化Fas死亡結構域相關蛋白抗體100 ul 甲狀腺素(T4)ELISA試劑盒FAK 粘著斑激酶抗體100 ul 甲狀腺球蛋白(TG)ELISA試劑盒Phospho-FAK (Tyr397) 酸化粘著斑激酶抗體20 ul |