產品名稱：雙氮纖維單胞菌
貨號：YS-01J13006
拉丁文: Cellulomonas biazotea

分離基物: Soil from Greenville Agr. Exp. Farm

提供形式: 凍干物

安全等級: 1

模式菌株: yes

應用領域: 模式菌株

培養(yǎng)基: NB

生長條件: 30℃，好氧，72h

存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

公司產品僅用于科研培養(yǎng)及打管說明：

1、安瓿瓶開封：用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復培養(yǎng)：用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中，并在建議的條件下培養(yǎng)。

3、注意事項：菌種活化前，請將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下，某些菌種經過冷凍干燥保存后，延遲期較長，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長

4、復蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復蘇后需保藏的斜面應于4℃中保藏。

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應在可能的范圍內盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產酸菌種，則應在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數年。本法應注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內，再放入低溫冰箱內進行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內，再置于冰箱內進行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產孢子的營養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數為28 ℃，少數為37 ℃，培養(yǎng)時間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農產品為培養(yǎng)基。這是由于這些農產品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng)，有時母瓶種子也可以直接進罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

Phospho-GCN2 (Thr899)  磷酸化蛋白激酶GCN2蛋白抗體ATP調節(jié)離子通道ROM K抗體

phospho-GCN2 (Thr667)  磷酸化蛋白激酶GCN2蛋白抗體ras基因相關蛋白Rab24抗體

phospho-GATA6(Tyr271)  磷酸化GATA結合蛋白6抗體視黃脫氫酶10抗體

phospho-GATA-4(ser 262)  磷酸化GATA結合蛋白4抗體Ras蛋白腦組織同源類似物RHEB蛋白抗體

phospho-GATA1(ser310)  磷酸化珠蛋白轉錄因子1抗體原癌基因相關蛋白RAP2B抗體

phospho-GATA1(ser142)  磷酸化珠蛋白轉錄因子1抗體視網膜母瘤結合蛋白5抗體

phospho-GAP43(Ser41)  磷酸化神經生長相關蛋白43抗體Rho相關蛋白激酶2抗體

phospho-GADD153 (Ser30)  磷酸化GADD153抗體核糖核苷酸還原酶亞基R2抗體

phospho-GABRG2(Ser327)  磷酸化γ氨基丁酸γ2受體抗體Runx3抗體

phospho-GABBR2 (Ser892)   磷酸化G氨基丁酸B型受體2抗體RAS相關GTP結合蛋白C抗體

phospho-GABBR2 (Ser783)  磷酸化G氨基丁酸B型受體2抗體R-鈣粘附分子抗體

phospho-GABBR1 (Ser923)  磷酸化gamma氨基丁酸B型受體1抗體ras癌基因家族RAB8B抗體

phospho-GAB2(Ser623)  磷酸化接頭蛋白Gab2抗體Ras樣蛋白B抗體

phospho-GAB2 (Tyr643)  磷酸化接頭蛋白Gab2抗體視網膜母瘤相關蛋白p130抗體

phospho-GAB2 (Tyr452)  磷酸化接頭蛋白Gab 2抗體維甲酸誘導蛋白17抗體
雙氮纖維單胞菌菌種傳代膠孢磷酸化鳥苷酸調節(jié)蛋白12抗體 Glycyrrhetinic acid 質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

金色毛殼珠蛋白轉錄因子1抗體 Liquiritin 質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

Pseudomonas plecoglossicida 谷胱甘肽過氧化酶3 Liquiritigenin 質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

Xenorhabdus谷胱甘肽過氧化酶4抗體 Glycyrrhizic acid 質量規(guī)格：UV>98%,BR

阿氏芽孢桿菌高爾基體膜蛋白GP73抗體 Glycyrrhizic acid 質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

大腸桿菌G蛋白偶聯(lián)受體172B抗體 Glycyrrhizic acid ammonium salt 質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

釀酒酵母生發(fā)中心B淋巴相關蛋白2抗體 Glycyrrhizic acid ammonium salt 質量規(guī)格：UV>97%,無水物,BR

非無菌藥品  沙門菌（陽性）G蛋白轉錄因子α3抗體 Diammonium Glycyrrhizate 質量規(guī)格：UV≥98%，標準品
微生物培養(yǎng)方法：

1、平板劃線分離法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面，通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞，經培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落。

2、稀釋涂布平板法將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。

上述兩種方法雖然都可以實現(xiàn)觀察菌落特征的目的，但平板劃線分離法不能對菌落計數，而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過程復雜，對平板的要求比較高，可參照以下步驟：

a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃，向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均勻，然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿，輕輕搖動培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部，待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。

b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g，放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖15～20min混合均勻，用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻，制成活性污泥混合液。

c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置，用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴展，使之分布均勻。