產(chǎn)品僅用于科研注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。 產(chǎn)品名稱:螺桿菌通用PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū) 英文名稱:Helicobacter spp.PCR 編號(hào):HE31065-R 類別:PCR檢測(cè)試劑盒 儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。 運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。 ? 儲(chǔ)需要自備的器材: 1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20 µL、200 µL、1000 µL)。 2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水 處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。 特點(diǎn): 1.即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡(jiǎn)單,定量準(zhǔn)確快速。 2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp。 3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 4. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。 保存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 氨基甲酸甲酯/氨基甲酸甲脂/甲基烏來(lái)坦/尿基烷/胺甲酸甲酯/甲烏來(lái)坦/氨基脲烷/Urethylane 包裝;1g 迭氮*基硅烷/*基甲硅烷基疊氮的化合物/疊氮*基硅烷/*基疊氮化硅/疊氮化*基硅烷/疊氮基*基硅烷/Azidotrimethylsilane 包裝;1g 對(duì)羥基苯/4’-羥基苯/對(duì)丙酰基苯酚/對(duì)甲氧苯乙酮/4′-Hydroxypropiophenone 包裝;5g 對(duì)苯二甲酰氯/1,4-苯二碳酰二氯/對(duì)酞酰氯/對(duì)苯二酰二氯/對(duì)苯二酰氯/氯化對(duì)苯二甲酰/對(duì)苯二甲酰二氯/對(duì)酞酰二氯/TCI/TPC 包裝;1g 4-氟-3-氯/氟氯/3-氯-4-氟/3-氨基-6-氟氯苯/3-Chloro-4-fluoroaniline 包裝;5g 乙酸甲脒/甲脒醋酸/甲脒乙酸酯/醋酸甲脒/甲脒乙酸鹽/醋酸甲醚/乙酸甲醚/Formamidinium acetate 包裝;1g 異香蘭酸/3-羥基-4-甲氧基苯甲酸/異香草酸/原兒茶酸-4-甲基醚/原兒茶酸-4-甲醚/Isovanillic acid 包裝;1g 焦磷酸四芐酯/焦磷酸四芐基酯/Tetrabenzyl pyrophosphate 包裝;250mg 3-吲哚甲醛/吲哚-3-甲醛/3-醛基吲哚/1H-吲哚-3-甲醛/3-甲醛吲哚/Indole-3-carboxaldehyde 包裝;5g 甲基異丙/3-甲基-2-丁酮/3-甲基丁酮/1,1-二甲基/甲基異丙基酮/異丙基甲/3-甲-2-丁酮/MIPK 包裝;100mg 十九酸甲酯/正十九酸甲酯/十九烷酸甲酯/十九碳酸甲酯/十九烷基甲酯/Methyl nonadecanoate 包裝;25mg 4-甲基-3-戊烯-2-酮/甲基異甲酮/甲基戊烯酮/米基化氧/亞異丙基/異丙叉/異基/異丙亞基/Mesityl oxide 包裝;25g 嘧啶/間(二)氮苯/間二嗪/2-氨基-4-甲氧基嘧啶/2-甲硫基嘧啶/嘧啶堿/Pyrimidine 包裝;5g 3-氨基-1,2-丙二酮/3-氨基-1,2-/1-氨基-2,3-/3-氨基甘油/2,3-二羥基胺氨/2,3-二羥基丙胺/3-氨基-1,2-丙烷二醇/氨基/3-Ami,2-propanediol 包裝;100g 鄰羥基芐醇/2-羥基苯甲醇/楊醇/鄰羥基苯甲醇/2-羥基芐醇/Salicyl alcohol 包裝;25g 1-苯基-1,2-丙二酮/甲基苯基乙二酮/1-苯-1,2-丙二酮/乙酸苯甲酸/Acetyl benzoyl 包裝;10g 氧化氘/重/Deuterium oxide 包裝;50g 螺桿菌通用PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)Bacillus│timonensis 中文名稱:芽胞桿菌(加詞待譯)種屬:Bacillus│timonensis分離基物:樣/養(yǎng)豬場(chǎng)沼氣池沼液提供形式:斜面培養(yǎng)物模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:潛在的生物轉(zhuǎn)化微生物/未經(jīng)過(guò)單菌驗(yàn)證的反硝化菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:33生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:98% Bacillus│cohnii 中文名稱:科氏芽胞桿菌種屬:Bacillus│cohnii分離基物:沉積物/TVG表層沉積物提供形式:凍干物模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:潛在的有機(jī)污染物降解菌/分離自十溴聯(lián)苯醚富集菌群培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:98% Erythrobacter│vulgaris 中文名稱:普通赤桿菌種屬:Erythrobacter│vulgaris分離基物:沉積物/硫化物提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:98% Brachybacterium│sacelli 中文名稱:教堂小短桿菌種屬:Brachybacterium│sacelli分離基物:沉積物/箱式樣品提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:海洋放線菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:98% Lentibacillus│sp. 中文名稱:慢生芽孢桿菌種屬:Lentibacillus│sp.分離基物:沉積物/重力活塞取樣提供形式:凍干物模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:潛在的新種培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:98% Aquimarina│spongiae 中文名稱:海綿海桿菌種屬:Aquimarina│spongiae分離基物:生物樣/海綿提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471生長(zhǎng)條件:30℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:99% Aquimarina│gracilis 中文名稱:海桿菌(加詞待譯)種屬:Aquimarina│gracilis分離基物:生物樣/貽貝腸道內(nèi)容物提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級(jí):1模式菌株:yes應(yīng)用領(lǐng)域:模式菌株:培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471生長(zhǎng)條件:25℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:99% Pseudochrobactrum│kiredjianiae 中文名稱:克氏假蒼白桿菌種屬:Pseudochrobactrum│kiredjianiae分離基物:沉積物/表層沉積物提供形式:凍干物安全等級(jí):1模式菌株:no應(yīng)用領(lǐng)域:潛在的無(wú)機(jī)污染物抗性菌/分離自Cr富集菌群培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:1001生長(zhǎng)條件:28℃存儲(chǔ)條件:液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法 純度:97%,含0.1 % 對(duì)苯二酚 穩(wěn)定劑 反應(yīng)五要素: 參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則: ①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。 ②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。 ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。 ⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。 ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。 ⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。 引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。 技術(shù)原理: DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。 在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性) 產(chǎn)品僅用于科研發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。 |