熒光染料的優點: 產品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產物結合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產物會影響結果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設計和反應條件的優化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途! 產品名稱 | 豬滑液支原體探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Mycoplasma hyosynoviae | 貨號 | YSP96979 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結合到模板上,探針的結合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發出熒光。檢測到的熒光分子數與PCR產物的數量成正比,因此,根據PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數量。 TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題,反應結束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術的優點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術的缺點: 成本高; 設計難度大; 只能用于檢測產物長度低于150bp的反應。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態性以及根據SNP區別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,PCR反應產物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環,收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化。而在平臺期,擴增產物已不再呈指數級的增加,PCR 的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據終的 PCR 產物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數。只有在熒光信號指數擴增階段, PCR產物量的對數值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 EP3 英文名稱: 前列腺素E受體3抗體 0.1ml 肝癌高表達基因抗體 Anti-PEG10 1ml Anti-SSTR3/FITC 熒光素標記生長抑素受體3(SSTR3)抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml Rhesus antibody Rh Phospho-MYPT1/MBS(Ser507) 酸化肌球蛋白酸酶抗體 規格 0.1ml MMP-2 基質金屬蛋白酶-2(多肽抗原)Multi-class antibodies規格: 0.5mg 人丁型肝炎IgG(HDV IgG)ELISA試劑盒英文名稱:human Hepatitis D virus IgG,HDV IgG ELISA Kit進口/原裝 人丁型肝炎IgM(HDV IgM)ELISA試劑盒英文名稱:Human Hepatitis D virus IgM,HDV IgM ELISA Kit進口/分裝 C12ORF54 英文名稱: 12號染色體開放閱讀框54抗體 0.2ml Anti-Insulin Receptor Alpha 胰島素受體α抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml PF(Human Pemphigus Foliaceus) ELISA Kit 人落葉型天皰瘡抗體Multi-class antibodies規格: 48T Anti-Integrin beta 7 整合素β7抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml Rhesus antibody Rh LIPG/Endothelial lipase 內皮脂肪酶抗體 規格 0.2ml HPV-IgG(Human papillomavirus IgG) ELISA Kit 人狀瘤病毒抗體IgG 96T REEP1 英文名稱: 受體輔助蛋白1抗體 0.2ml CK7 單克隆抗體CK7 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul CK8 單克隆抗體CK8 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul CK16 單克隆抗體CK16 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 尾部型同源框轉錄因子2 單克隆抗體CDX2 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 肌球蛋白重鏈 單克隆抗體Myosin Heavy Chain Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 神經膠質原纖維酸性蛋白 單克隆抗體GFAP Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 豬滑液支原體探針法熒光PCR檢測試劑盒CHES1蛋白抗體Survivin/FITC 綠色熒光素標記Survivin蛋白抗體IgG100 ul 哺動物酸性幾丁質酶抗體Survivin/PE 熒光素PE標記細胞凋亡抑制因子抗體IgG100 ul 幾丁質酶結構域蛋白1抗體SUR1/FITC 熒光素標記磺酰脲類藥物受體1抗體IgG20 ul 嵌合蛋白2/β2-chimaerin抗體SYK/FITC 熒光素標記非受體型酪氨酸蛋白激酶抗體IgG100 ul 幾丁質酶1抗體Phospho-Syk (Tyr323) /FITC 熒光素標記酸化非受體型酪氨酸蛋白激酶抗體IgG100 ul 白細胞抗原CD97 alpha 抗體Phospho-Syk (Tyr525/526) /FITC 熒光素標記酸化非受體型酪氨酸蛋白激酶抗體IgG100 ul 緊密連接蛋白2抗體SYT3/FITC 熒光素標記突觸結合蛋白3抗體IgG100 ul 緊密連接蛋白7抗體SAP-1/FITC 熒光素標記抗突觸素抗體IgG100 ul 2號染色體開放閱讀框53抗體Synapsin I /FITC 熒光素標記神經突觸素1抗體IgG100 ul PCR技術的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數形式增加的,隨著反應循環數的增加,終PCR反應不再以指數形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產物已不再呈指數級的增加,PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據終的PCR產物量不能計算出初始模板量。 |