熒光定量PCR試劑盒技術：
產品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環形凸起，兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。 產品名稱 | 弗氏檸檬酸桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Citrobacter freundii | 貨號 | YSP96550 |
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
1,2,4,5-四(NMR定量標準品,99.8%(GC))Acetyl-Histone H2A (Lys5) Antibody2-氟-溴乙 熔點標準品(+235 to +237℃)Phospho-Histone H2A.X (Ser139) Antibody2-基-4'-甲基聯 1,(標準品)Phospho-Histone H2A.X (Ser139) Antibody1-Boc-羥甲基吡咯烷 二硫化四甲基秋蘭姆(標準品)Histone H2A Antibody II()戊二酸單酰 正己烷標準溶液(1000μg/ml,基體：甲)GIRK2 (D6C2T) Rabbit mAb2-氟-吡啶 順式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六酸(標準品)Ribosomal Proin S3 Antibody(2R)-(-)-縮水甘油基對甲磺酸酯 二甲硝咪唑(標準品)MAGE-A3 Antibody4,6-二甲氧基-2-甲磺酰基嘧啶 N-(2-羥乙基)乙二-N,N′,N′-三乙酸 三鈉鹽 溶液(~41% in H2O (T))Keratin 5 (D4U8Q) Rabbit mAb4,4'-二甲基-2,2'-聯吡啶 青霉素V(標準品)Phospho-Stat1 (Tyr701) (D4A7) Rabbit mAb (PE Conjuga)2,二氟芐基溴 2-NP-AOZ(標準品)Phospho-IRS-1 (Ser332/336) Antibody基甲酸甲酯 磺醋酰(標準品)Phospho-PP1α (Thr320) Antibody3,二氟肉桂酸 磺喹噁啉(標準品)SPAR (D9P9T) Rabbit mAb氯酯 磺氯吡(標準品)PP1α Antibody硫酸阿托品 泰妙菌素(標準品)GLI2 (R770) Antibody2,5-二氯對二甲 甲酸銨(用于質譜,≥99.0%)IGFBP3 (D1U9C) Rabbit mAb2-溴噻唑-甲酸乙酯 甲(色譜級, ≥99.5%(GC))PCNA (PC10) Mouse mAb2-羥基-甲基吡啶 甲基叔丁基(農殘級,≥99.9%(GC）)PCNA (PC10) Mouse mAb二氨基藍 BB 甲基叔丁基(GC,≥99.9%(GC))TORC1/CRTC1 (C71D11) Rabbit mAb茉莉酸
弗氏檸檬酸桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒B細胞活化因子(BAFF)ELISA試劑盒MuRF1/Trim63 肌肉細胞特異性泛素蛋白連接酶1抗體100 ul B細胞κ 輕肽基因增強子核因子抑制因子ε(NFKBIE)ELISA試劑盒MyD88 髓樣分化蛋白抗體20 ul B群鏈球菌多糖抗體(IgG)ELISA試劑盒NIPP1/ARD1 核抑制蛋白酸酶1抗體100 ul B-淋巴細胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA試劑盒Myelin Proin Zero 外周髓脂P0蛋白/P0蛋白抗體100 ul B淋巴細胞抗原(CD20)ELISA試劑盒PMP2 周圍神經髓鞘蛋白2抗體100 ul blca-4 ELISA試劑盒MYSM1 MYSM1抗體100 ul blca-1 ELISA試劑盒MYOZ/MYOZ1 MYOZ抗體100 ul Bcl-2樣蛋白1(BCL2L1)ELISA試劑盒MyoD1/Myf3 肌原調節蛋白抗體100 ul B7-H4 ELISA試劑盒SM Myosin (Smooth Muscle) 心肌肌凝蛋白(平滑肌) 單抗20 ul |
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