熒光染料的優(yōu)點：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價格便宜；
熒光染料的缺點：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別，進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

?
熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團，3'端標(biāo)記淬滅基團。
正常情況下兩個基團的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時，引物與該探針同時結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴增延伸到探針結(jié)合的位置時，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測，縮短了實驗時間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點：
成本高；
設(shè)計難度大；
只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
?
熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán)，收集一個熒光強度信號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
一般而言，熒光擴增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段， PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便，在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
對硝(分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析)Phospho-Src (Tyr527) AntibodyN,N'-二咪唑基乙二酰

對硝標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑：甲)Hexokinase II Antibody6-羥基-5-正癸酮

對硝標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.04mg/ml,基體：甲)Non-phospho-Src (Tyr527) Antibody(S,S)-雙[(2-甲氧基基)基]乙烷

辛酮(Standard for GC, ≥99.5% (GC))Non-phospho-Src (Tyr527) Antibody2-甲基-庚酮

1-十八(標(biāo)準(zhǔn)品)Src Antibody甲基-2-吡咯羧酸乙酯

辛(標(biāo)準(zhǔn)品)Src (36D10) Rabbit mAb環(huán)烷酸鋅

十八烷(標(biāo)準(zhǔn)品)Src (36D10) Rabbit mAbΑ,Α'-二基對二甲

2-辛酮(標(biāo)準(zhǔn)品)Src (L4A1) Mouse mAb1,二基-2--1-酮

對羥基聯(lián)(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Mnk1 (Thr197/202) Antibody5-氯甲基-2-呋喃甲酸乙酯

鄰二甲酸二己酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Cycloheximide5-甲基-異噁唑羧酸乙酯

準(zhǔn)溶液(濃度范圍:776(mg/L),分析標(biāo)準(zhǔn)品)Rictor (53A2) Rabbit mAb銅-PAN絡(luò)合物(CU-EDTA+PAN)

氧乙酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Rictor (53A2) Rabbit mAb3,3'-二氟聯(lián)

2-基酚(標(biāo)準(zhǔn)品)SRC-3 (11B1) Mouse mAb2,6-二溴甲酸

正戊(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.8%(GC))β-Tubulin (9F3) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjuga)1,3,6,8-四溴芘

菲標(biāo)準(zhǔn)溶液(395μg/mL,基體:甲)RhoA (67B9) Rabbit mAb7-甲氧基-磺酰-1(3H)-異并呋喃酮

菲(標(biāo)準(zhǔn)品)RhoA (67B9) Rabbit mAbchloro-methoxytoluene

標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.00mg/ml,基體:甲)GAPDH (14C10) Rabbit mAb2-氯-1,二硫酸鹽

吡啶(標(biāo)準(zhǔn)品)GAPDH (14C10) Rabbit mAb吡啶-2-羧硫酸
封閉毛細線蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒β-連環(huán)蛋白(CTNNB1/CTNNB/OK/SW-cl.35/PRO2286)ELISA試劑盒LAMA3/Laminin 5 alpha 3  層粘蛋白α3抗體100 ul

β膠原交聯(lián)(bCTx)ELISA試劑盒Beta-lactoglobulin  β-球蛋白抗體100 ul

β-肌動蛋白(β-actin)ELISA試劑盒Beta-lactoglobulin  β-球蛋白抗體100 ul

β-黑色素細胞刺激素(β-MSH)ELISA試劑盒Beta-lactoglobulin  β-球蛋白抗體100 ul

β甘露糖苷酶(β Manase)ELISA試劑盒LAG-3/CD223  淋巴細胞活化基因-3抗體100µl

β-防御素3 ELISA試劑盒Langerin/CD207  白細胞分化抗原CD207抗體100 ul

β-防御素2 ELISA試劑盒LAP18/Stathmin  白血病相關(guān)蛋白18/癌蛋白18抗體20 ul

β防御素104(DEFB104A)ELISA試劑盒Phospho-Stathmin (Ser16)  酸化原癌基因蛋白18500 ul

β-防御素1(DEFB1)ELISA試劑盒Phospho-Stathmin (Ser38)  酸化原癌基因蛋白18100 ul
PCR技術(shù)的定量原理：
擴增曲線
在Real- qPCR中，對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應(yīng)的進行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進入“平臺期”。在該時期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。