熒光定量PCR試劑盒技術: 產品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設有限位凸起,下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋,側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設有環形凸起,兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內部設有固定桿,固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析,提供實驗報告給您。 產品名稱 | 寄生水霉探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Saprolegnia parasitica | 貨號 | YSP97173 |
樣品RNA的抽提: ①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。 實驗過程: 一、試劑準備 1. DNA模板 2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。 3.產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 松弛肽2(RLN2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 膠紅酵母 25g 松弛肽3(RLN3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 簡單芽孢桿菌 5g 二肽基肽酶3(DPP3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% pQE70 25g 二肽基肽酶7(DPP7)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 橙色單胞菌 5g 二肽基肽酶8(DPP8)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 99% 大腸埃希菌 5g 胞漿-5',3'-核苷酸酶(NT5C)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 糞腸球菌 1g 線粒體-5'-核苷酸酶(NT5M)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 路德類酵母 5g 3',5'-二酸核苷酸酶1(BPNT1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 95% 大腸埃希氏菌(大腸桿菌) 1g 受體2(TR2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 95% 地衣芽孢桿菌 250mg 受體4(TR4)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) technical, ≥85% (GC) ,含銅屑穩定劑 核盤菌 100g 延伸蛋白A2(ELOA2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) technical, ≥85% (GC) ,含銅屑穩定劑 芽胞桿菌ATCC 9372;(曾用名:枯草芽胞桿菌黑色變種) 25g 延伸蛋白B(ELOB)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 枯草芽孢桿菌 25g 延伸蛋白C(ELOC)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 戊糖乳桿菌 5g 二甲基精氨酸二水解酶2(DDAH2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 枯草芽孢桿菌 1g 組織蛋白酶O(CTSO)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 拱狀靈芝 25g 谷胱甘肽過氧化酶5(GPX5)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% *灰葡萄孢 5g 圍脂滴蛋白5(PLIN5)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% Chitinophagaceae sp. 100g 圍脂滴蛋白4(PLIN4)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 巴氏醋桿菌巴氏亞種 25g 寄生水霉探針法熒光PCR檢測試劑盒絲裂原活化蛋白激酶3抗體Smac/DIABLO(the second mitochondrial activator of caspase) 線粒體促凋亡蛋白抗原100 ul 雌激素受體α抗體SLC33A1(Acetyl-coenzyme A transportor 1) 酰輔酶A轉運蛋白1抗原100 ul 雌激素受體β 抗體SLC34A2/NaPi-2b(Solu carrier family 34 member 2) 酸鈉協同轉運蛋白抗原100µl 上皮特異性抗原抗體SMN1(survival of motor neuron 1) 運動神經元生存蛋白1抗原100 ul 內皮素-1抗體phospho-Smad2(p-Ser465)petide 酸化Smad2抗原100 ul 天冬氨酸蛋白酶家族蛋白抗體Smad4(Mothers against decapentaplegic homolog 4) Smad4抗原100 ul 蝮蛇蛇毒蛋白抗體Smad7(Mothers against decapentaplegic homolog 7) Smad 7(多肽)100 ul 轉錄因子E2F-2抗體phosphor-SMAD(p-Ser425)、phosphor-Mothers against decapentaplegic 酸化SMAD(p-Ser425)抗原20 ul 內皮細胞受體蛋白酪氨酸激酶抗體SNAP-25 (synaptosomal-associad proin 25) 突觸相關膜蛋白25抗原100 ul |