特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 沙門氏菌通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Salmonella spp. | 貨號 | YSP97170 |
熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實(shí)驗(yàn)時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計(jì)難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì),熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強(qiáng)度信號,這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 肌球蛋白ⅩⅤ(MYO15)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 啤酒神金黃桿菌 25ml 肌球蛋白ⅩⅥ(MYO16)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 卷枝毛霉灰藍(lán)變型 250mg 原肌球蛋白2β(TPM2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 微枝形桿菌 100mg 原肌球蛋白3(TPM3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 糙梗青霉 1g 原肌球蛋白4(TPM4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99% 淺白隱球酵母 500mg 肌球蛋白ⅤB(MYO5B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥98% 釀酒酵母 10MG 肌球蛋白ⅨB(MYO9B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) ≥98% 白藍(lán)放線菌 50MG 肌球蛋白ⅩⅧA(MYO18A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99.99% metals basis,325目 根瘤菌 100g 肌球蛋白ⅩⅧB(MYO18B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99.99% metals basis,325目 堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌 25g 絲氨酸蛋白酶23(PRSS3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 99.99% metals basis,325目 Mucilaginibacter sp. 5g 神經(jīng)肽W(NPW)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 大腸埃希菌 1g 鞘脂合酶1(SGMS1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 米曲霉 25g 5-羥色胺受體4(HTR4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 普通變形菌 5g 5-羥色胺受體6(HTR6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 95% 異配囊接霉 1g 酰復(fù)合胺-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(ASMT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 95% 香菇 250mg 5-羥色胺受體7(HTR7)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 95% 頭孢霉 5g 載脂蛋白L2(APOL2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) Ru 35.8-36.1% 涇陽鏈霉菌 1g 載脂蛋白L3(APOL3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) Ru 35.8-36.1% 窄食單胞菌 500mg 沙門氏菌通用探針法熒光PCR檢測試劑盒膠質(zhì)細(xì)胞谷氨酸運(yùn)載蛋白2抗體Rho C(Ras homolog gene family member C) RhoC抗原1 Pack 膠質(zhì)細(xì)胞谷氨酸運(yùn)載蛋白3抗體(神經(jīng)/上皮細(xì)胞谷氨酸運(yùn)載蛋白)RNF148(Ring finger proin 148) 環(huán)指蛋白148抗原1 Pack 內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶2抗體ROCK1 (Rho-associad coiled-coil containing proin kinase 1) Rho相關(guān)蛋白激酶1抗原100 ul 嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白抗體ROCK2 (Rho-associad coiled-coil containing proin kinase 2) Rho相關(guān)蛋白激酶2抗原100 ul 類表皮生長因子域7抗體RXR Alpha(retinoid-X receptor alpha) 核受體RXRα抗原1 ml α彈性蛋白抗體S6PDH(NADP sorbitol-6-phospha dehydrogenase) 6-酸山梨醇脫氫酶抗原15 ml 黃熱病毒包膜糖蛋白抗體S100B S100B蛋白抗原100 ul HER2受體抗體S100B(S100 calcium binding proin B)(human, mouse, rat, bovine, Rabbit, chicken) S100B蛋白多肽100 ul 轉(zhuǎn)錄因子E2F-4抗體S-100A1 (S100 calcium-binding proin A1) 鈣結(jié)合蛋白S100A1抗原20 ul |