熒光定量PCR試劑盒技術(shù): 產(chǎn)品僅用于科研本實用新型技術(shù)公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒,包括盒體,盒體由上盒體和下盒體組成,上盒體的底面上設(shè)有限位凸起,下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽,且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋,側(cè)蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾,下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起,兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上;凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿,固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架;下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分,并將兩個部分通過側(cè)蓋連接,即可保證試劑盒的便攜性,同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。 客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設(shè)計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析,提供實驗報告給您。 產(chǎn)品名稱 | 豬細小病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Porcine Parvovirus(PPV) | 貨號 | YSP97095 |
樣品RNA的抽提: ①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。 ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。 ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 2 RNA質(zhì)量檢測 1)紫外吸收法測定 先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。 ① 濃度測定 A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。 實驗過程: 一、試劑準備 1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μ Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測 三、注意事項 1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設(shè)立一個的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。 3.產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 兒茶酚-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(COMT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 勒氏寡食單胞菌 5g 核糖體蛋白S6激酶β1(RPS6Kβ1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 蘋果交鏈孢 5g 骨髓基質(zhì)細胞抗原1(BST1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 阪崎腸桿菌 100g Saitohin蛋白(STH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 枯草芽孢桿菌 25g 腺苷A2b受體(ADORA2b)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98% 嗜熱脂肪地球芽胞桿菌 10g 鳥苷酸環(huán)化酶激活因子2B(GUCA2B)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 微小毛霉 1g 組織金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥98% 綠針假單胞菌 25g 饑餓素(GHRL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) ≥98% 斯氏假單胞菌 5g 生長分化因子11(GDF11)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 日本根霉 1g SPARC樣蛋白1(SPARCL1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 球形賴氨酸芽孢桿菌 250mg 防御素β112(DEFβ112)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) >98.0%(GC) 蠟?zāi)佟?g 血管生成素樣蛋白6(ANGPTL6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) >98.0%(GC) 黑曲霉 25g IgG-Fc片段低親和力受體Ⅲa(FcγR3A)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) >98.0%(GC) 枯草芽孢桿菌 5g 信號傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 75% 擬黑馬朗假絲酵母 25ml 載脂蛋白C3(APOC3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 95% 枯草芽孢桿菌 250mg 載脂蛋白C2(APOC2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 97% 耶納農(nóng)球菌 50g Janus激酶2(JAK2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 99% 中慢生華癸根瘤菌 5g 旁血小板溶蛋白(PPL)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法) 98%,含0.1%碳酸鈣穩(wěn)定劑 黑曲霉 25g 豬細小病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒嗜酸粒細胞趨化蛋白24抗體NOS-1(bNOS:neuronal NOS:nNOS:Nitric Oxide synthase-1) 一氧化氮合成酶-1(抗原)100 ul 巨噬細胞炎性蛋白15NOS-2 (iNOS) Nitric Oxide Synthase,Inducible 一氧化氮合成酶-2(抗原)100 ul 巨噬細胞炎性蛋白抗體Batroxobin 蛇***毒***巴***曲***酶***抗***原20 ul CD72蛋白抗體NOS-3 (eNOS) endotheli cell NOS 一氧化氮合成酶-3(抗原)100 ul 中心體蛋白128抗體NPY ( Neuropeptide Y) 神經(jīng)肽 Y(抗原)100 ul 著絲粒蛋白O抗體NR2B (Glutama receptor) 谷氨酸受體(抗原)20 ul 3號染色體開放閱讀框17抗體NT-3 神經(jīng)生長因子-3(抗原)100 ul 細胞質(zhì)膜微囊蛋白-2抗體NT-4,NT-5 神經(jīng)生長因子4/5(抗原)10 ug 酸化細胞質(zhì)膜微囊蛋白-2抗體NTN (Neurturin) 神經(jīng)生長因子(抗原)10 ug |