微生物菌種的培養：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養基，培養基中含有一些適合產孢子的營養成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養環境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養可直接或間接誘導孢子形成。面的培養溫度大多數為28 ℃，少數為37 ℃，培養時間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農產品為培養基。這是由于這些農產品中的營養成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養一般為25～28 ℃，培養時間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養，有時母瓶種子也可以直接進罐。種子培養基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養成分不宜過濃，子瓶培養基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養基配方。

產品名稱：動物乳桿菌
貨號：YS-01J13439
拉丁文: Lactobacillus animalis

提供形式: 凍干物

安全等級: 1

模式菌株: yes

應用領域: 模式菌株

培養基: MRS培養基：酪胨 10.0g，牛肉粉 8.0g，酵母粉 4.0 g，葡萄糖 20.0 g，硫酸鎂 0.2 g，乙酸鈉 5.0 g，檸檬酸三銨 2.0 g，磷酸氫二鉀 2.0 g，硫酸錳 0.05 g，吐溫80 1.0 g，蒸餾水 1000mL。pH6.2±0.2。121℃，15min。

生長條件: 37℃，微好氧

存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

公司產品僅用于科研培養及打管說明：

1、安瓿瓶開封：用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復培養：用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養基，滴入安瓿管內，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養基試管中，并在建議的條件下培養。

3、注意事項：菌種活化前，請將安瓿管保存在6-10℃的環境下，某些菌種經過冷凍干燥保存后，延遲期較長，需要連續兩次繼代培養才能正常生長

4、復蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復蘇后需保藏的斜面應于4℃中保藏。

保存方法：

傳代保存法：培養基的濃度不宜過高，營養成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應在可能的范圍內盡量降低。培養溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產酸菌種，則應在培養基中添加少量碳酸鈣 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數年。本法應注意避免水分的蒸發。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內，再放入低溫冰箱內進行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內，再置于冰箱內進行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

微生物培養方法：

1、平板劃線分離法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環圈在平板培養基表面，通過分區劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞，經培養后生長繁殖成單菌落。

2、稀釋涂布平板法將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養基的表面進行培養，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養基表面形成單個菌落。

上述兩種方法雖然都可以實現觀察菌落特征的目的，但平板劃線分離法不能對菌落計數，而稀釋涂布平板法培養過程復雜，對平板的要求比較高，可參照以下步驟：

a、制備平板培養基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養基加熱溶化并冷卻至65℃，向氯化鈉蔗糖瓊脂培養基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均勻，然后取20ml混合均勻的培養基溶液倒入培養皿，輕輕搖動培養皿，使培養基溶液均勻分布在培養皿底部，待培養基溶液凝固后即得平板培養基。

b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g，放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖15～20min混合均勻，用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻，制成活性污泥混合液。

c、培養基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培養基表面的中央位置，用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴展，使之分布均勻。

兔上皮膜抗原(EMA)  降鈣素，大鼠特異性核苷酸果糖β抗體

兔β2糖蛋白(β2-GP) 降鈣素基因相關肽（8-37），人11號染色體開放閱讀框73抗體

兔低氧上調節因子1(HYOU1) 降鈣素基因相關肽Ⅱ，人磷酸乙轉移酶A抗體

兔可溶性轉鐵蛋白受體1(sTfR1)降鈣素基因相關肽，大鼠前列環素受體抗體

兔補體因子I(CFI)蛋白酶1底物2m，熒光原鈣粘蛋白7抗體

兔糖鏈抗原19-9(CA19-9)  蛋白酶3底物1m，熒光過氧化物酶膜蛋白1抗體

兔雙腎上腺皮質激素樣激酶1(DCLK1)抗菌肽B;天蠶絲抗菌肽橋粒斑菲素蛋白2抗體

兔早期生長應答蛋白1(EGR1)卡律蝎素胞粘蛋白結合調節蛋白抗體

兔晶狀體蛋白αB (CRYαB)促皮質素釋放因子，綿羊絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶PCTK2抗體

兔軸突生長誘向因子1(Ntn1)結晶磷酸二酯酶7抗體

兔角化內分泌因子(KAF)Delta-催黑激素磷酸二酯酶7B抗體

兔CXC趨化因子受體1(CXCR1) 內皮素2，人，犬先天性眼外肌纖維化相關蛋白FEOM2抗體

兔蛋白激酶C-β1(PKCβ1)內皮素3，人，大鼠神經母瘤蛋白PHOX2B抗體

兔線粒體解偶聯蛋白2(UCP-2)趨嗜曙紅肽周期蛋白依賴性激酶5激活因子1抗體

兔核受體相互作用蛋白1(NRIP1)晰外泌肽4肌動蛋白相關蛋白2/3復合體亞基5抗體

兔胸腺五肽(TP5) 血纖肽B，人浦肯野相關蛋白1抗體
動物乳桿菌規格貝萊斯芽胞桿菌P-鈣粘附分子抗體

木賊鐮孢菌腺苷酸環化酶激活肽-38抗體

淺灰白鏈霉菌腫瘤抑制基因P53蛋白抗體（野生型P53）

假單胞菌屬腫瘤抑制基因p63α抗體

釀酒酵母磷酸二酯酶4A8抗體

玉米大斑病菌血小板源性生長因子AB+BB抗體

薄花邊傘增殖核抗原抗體

東方伊薩酵母腦特異性多肽蛋白19抗體