微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養(yǎng)環(huán)境，不利于形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導孢子形成。面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備　

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備　

搖瓶種子進罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng)，有時母瓶種子也可以直接進罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

產(chǎn)品名稱：NRS 1221A
貨號：YS-01J12809
拉丁文: Bacillus atrophaeus Nakamura

提供形式: freeze-dried

安全等級: 1

模式菌株: no

應(yīng)用領(lǐng)域: Resistance Testing<br>Dry heat sterilization control<br>Efficacy testing<br>Ethylene oxide sterilization control<br>Media testing<br>Steam sterilization control<br>Sterility assur

公司產(chǎn)品僅用于科研培養(yǎng)及打管說明：

1、安瓿瓶開封：用浸過75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復培養(yǎng)：用無菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中，并在建議的條件下培養(yǎng)。

3、注意事項：菌種活化前，請將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，延遲期較長，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長

4、復蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。

保存方法：

傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣 。

液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長，適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。

懸液保存法：

① 蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。

② 糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。

載體保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅膠保存法；④磁珠保存法；⑤麩皮保存法；⑥紙片(濾紙)保存法。

常用的冷凍保存法：

① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便，也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多，有些可添加保護劑。此外，也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi)，再放入低溫冰箱內(nèi)進行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內(nèi)，再置于冰箱內(nèi)進行冷凍保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是適用范圍*的微生物保存法。

微生物培養(yǎng)方法：

1、平板劃線分離法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面，通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落。

2、稀釋涂布平板法將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。

上述兩種方法雖然都可以實現(xiàn)觀察菌落特征的目的，但平板劃線分離法不能對菌落計數(shù)，而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過程復雜，對平板的要求比較高，可參照以下步驟：

a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃，向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3～5ml并混合均勻，然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿，輕輕搖動培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部，待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。

b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g，放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖15～20min混合均勻，用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻，制成活性污泥混合液。

c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml，滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置，用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴展，使之分布均勻。

VAV2  癌基因VAV2抗體KB抑制蛋白激酶β抗體

VAV1  鳥苷酸轉(zhuǎn)換因子VAV1抗體白介素17受體D抗體

VAT1L/KIAA1576  突觸小泡膜蛋白同源樣蛋白1抗體白介素-17B抗體

VAT  囊泡乙酰膽堿通道抗體吲哚乙酸/植物生長素單克隆抗體

VASP  血管擴張激磷蛋白抗體白介素4受體抗體IL-4Rα

VASH1  血管抑制蛋白1抗體白介素2受體γ鏈抗體

VAPB  囊泡相關(guān)膜蛋白相關(guān)的蛋白B白介素1受體1抗體

VAPA  囊泡相關(guān)膜蛋白相關(guān)蛋白A抗體白介素1受體2抗體

VAP1  血管粘附蛋白1抗體白介素20受體α鏈抗體

VANGL2  神經(jīng)管畸形相關(guān)蛋白VANGL2抗體白介素20受體β鏈抗體

VANGL1/LPP2  腫瘤抑制基因LPP2抗體吲哚乙酸抗體/植物生長素抗體

VAMP-3  囊泡相關(guān)膜蛋白3抗體整合素α6抗體

VAMP-2  囊泡相關(guān)膜蛋白2抗體擬南芥IKI3抗體

VAMP-1/Synaptobrevin-1  VAMP1囊泡相關(guān)膜蛋白1抗體白介素5抗體

VAM1/MPP6  棕櫚酰化膜蛋白6抗體白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體
NRS 1221A說明書WAL 14507 [DSM 19850]膜二肽酶3抗體 L-Arginine L-glutamate 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

假灰鏈霉菌雙特異性磷酸酶13抗體 L-Arginine AKG 2:1 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

嗜糖黃桿菌DIM-7蛋白抗體 S-Acetamidomethyl-L-cysteine hydrochloride 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

雙重輪絲鏈霉菌核糖核酸酶Dicer抗體 O-tert-Butyl-L-threonine methyl ester hydrochloride 質(zhì)量規(guī)格：0.98

頂青霉內(nèi)皮和平滑肌衍生的神經(jīng)纖毛蛋白抗體 L-Alanine isopropyl ester hydrochloride 質(zhì)量規(guī)格：>98%

Nesterenkonia flava含錨蛋白重復序列-因子信號抑制物盒蛋白家族2抗體 Methyl L-asparaginate monohydrochloride 質(zhì)量規(guī)格：0.98

釀酒酵母DNA連接酶1抗體 L-Aspartic acid di-tert-butyl ester hydrochloride 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

巴氏醋桿菌DHH蛋白抗體 L-Glutamine t-butyl ester hydrochloride 質(zhì)量規(guī)格：0.98